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AtELHYPRP2基因属于EARLI1亚家族,无内含子,开放阅读框大小为534bp,编码的蛋白质由N端的信号肽序列(1-26)、中间富含脯氨酸的亲水性结构域PRD(27-94)和C端保守的疏水性8CM(95-177)构成,理论等电点和分子量分别为8.93和18.35kDa。数据库中保存的芯片实验结果显示AtELHYPRP2基因可以被生物和非生物胁迫因素诱导,说明该基因在拟南芥抗逆性方面具有一定的作用。本工作以拟南芥Col-0生态型基因组DNA为模板,通过聚合酶链反应分离了AtELHYPRP2基因的编码序列。由于AtELHYPRP2基因内部存在Nco Ⅰ识别序列,所以在上下游引物的5’-端分别增加了Pag Ⅰ (Nco Ⅰ同尾酶)和Spe Ⅰ的酶切位点。扩增产物经Pag Ⅰ、Spe Ⅰ分步酶切后,与Nco Ⅰ和Spe Ⅰ双酶切的pCAMBIA1302大片段进行连接,构建产生pCAMBIA1302-AtELHYPRP2-GFP融合表达载体。进一步用携带重组质粒的农杆菌LBA4404菌株侵染烟草叶片外植体,筛选得到转基因烟草植株。RT-PCR和Western印迹分析证实,AtELHYPRP2-GFP融合基因在转基因烟草中可以有效表达。激光共聚焦显微观察发现AtELHYPRP2-GFP融合蛋白产生的绿色荧光与碘化丙啶染色后产生的红色荧光能够重合,说明AtELHYPRP2蛋白定位于细胞表面,并且主要存在于细胞壁中。用赤霉菌孢子接种转基因烟草植株的叶片,结果显示组成性表达AtELHYPRP2基因能够增强烟草对真菌病原体的抗性,被侵染部位有明显的H2O2积累。对转基因烟草的系统获得性抗性(SAR)进行研究,发现转基因烟草植株中PR1基因的本底表达水平比野生型高,PR1和PR5基因的系统表达水平比野生型高,说明AtELHYPRP2基因与植物系统防御反应有关。另外,本工作还构建了AtELHYPRP2基因的原核表达载体。首先以拟南芥Col-0生态型基因组DNA为模板,扩增产生不含信号肽编码区的AtELHYPRP2基因序列,然后用T4DNA连接酶对经过双酶切的扩增片段和pET28a进行连接,得到pET-28a-AtELHYPRP2。接着对重组质粒转化的BL21(DE3)大肠杆菌细胞进行了菌落PCR鉴定,为后续AtELHYPRP2蛋白的大量表达和体外抑菌实验打下了良好的基础。