论文部分内容阅读
目的:探讨铀矿尘致RAW264.7炎症反应过程中NF-κB对TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS和NO的调节作用,分析核转录因子NF-κB在铀矿尘致肺部损伤机制中的作用,以及寻找抑制铀矿尘致肺纤维化的重要靶点。方法:采用MTT法检测不同浓度铀矿尘作用于RAW264.7细胞不同时间对细胞存活率的影响;Western Blot检测铀矿尘对细胞核内NF-κB p65蛋白及细胞浆内iNOS蛋白表达的影响;Q-PCR检测铀矿尘对RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的影响;ELISA检测铀矿尘对RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1含量的影响;硝酸还原酶法检测铀矿尘对RAW264.7细胞培养上清液中NO含量的影响。结果:MTT结果显示0、15、30、60、120、240μg/cm2浓度铀矿尘分别作用于RAW264.7细胞12、24、48h后,RAW264.7细胞存活率呈作用剂量和作用时间依赖性下降。60μg/cm2铀矿尘作用于RAW264.7细胞后,细胞核内NF-κB p65蛋白表达水平随着铀矿尘作用时间的延长呈上升趋势,至12h时铀矿尘组NF-κB p65蛋白相对表达量是对照组的5.10倍;细胞内TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的表达水平较对照组升高;细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1以及NO含量随着铀矿尘作用时间的延长呈上升趋势,至24h时铀矿尘组TNF-α、IL-6、MCP-1及NO表达量分别为(12827.78±518.77)pg/ml、(224.63±10.38)pg/ml、(4178.59±26.04)pg/ml、(202.30±10.62)μmol/L,均显著高于该时间点对照组的表达量;细胞浆内i NOS蛋白表达水平随着铀矿尘作用时间的延长呈上升趋势,至24h时铀矿尘组i NOS蛋白相对表达量是对照组的4.50倍。用25μmol/L PDTC干预后,细胞核内NF-κB p65蛋白表达水平与对照组接近,显著低于铀矿尘组的表达水平;细胞上清液中TNF-α、IL-6、NO含量明显低于铀矿尘组,与对照组表达量较接近;细胞上清液中MCP-1含量与铀矿尘比较差异无统计学意义,明显高于对照组的表达水平;细胞浆中iNOS蛋白表达水平与对照组接近,显著低于铀矿尘组的表达水平。结论:1.15-240μg/cm2铀矿尘可以抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞增殖并诱导其NF-κB、TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS及NO表达升高;2.25μmol/L NF-κB抑制剂PDTC可以在一定程度上干预铀矿尘所致的巨噬细胞炎性损伤。