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目的:对体外培养的神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)进行诱导分化,观察其分化为多巴胺能神经元的能力和条件,为进一步利用NSCs移植治疗帕金森病奠定技术基础。 方法:取怀孕13.5-14.5天SD大鼠胚胎大脑皮层细胞,添加表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维生长因子(basic fiber growth factor,bFGF)和B27进行体外无血清培养筛选NSCs;取P3代NSCs在不同条件下进行诱导分化,观察其向酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的分化能力。诱导分化条件分为:(1) 将携带核受体相关因子1(Nurr1)基因的重组质粒pcDNA3.1-hygro—Nurr1,电穿孔法转染NSCs,并进行分化实验;(2) 利用全反式维甲酸(alltrans-retinoic acid,ATRA)和银杏提取物(Extracts of Ginkgo Biloba,Egb)对NSCs进行诱导分化;(3) 制备骨髓基质细胞饲养层,利用饲养层细胞与NSCs共培养来观察其分化能力;(4) 观察胎牛血清诱导NSCs分化。用免疫细胞化学方法对分化细胞进行递质表型鉴定,并且对阳性染色细胞计数进行统计分析。 结果:(1) 携带Nurr1基因的重组质粒电穿孔法转染NSCs并经潮霉素筛选后,免疫组化染色检测到Nurr1表达。传代细胞分化7天后酪氨酸羟化酶免疫组化染色阳性神经细胞比率为27.20%±7.12%;与自然分化组差异有显著性(p<0.01)。(2)ATRA诱导分化组、Egb诱导分化组及ATRA+Egb组TH阳性神经元的百分比分别为12.02%±2.78%、18.13%±1.74%和13.03%±2.54%,均显著高于对照组5.74%±1.81%。Egb诱导分化组及ATRA+Egb组乙酰胆碱酯酶(AshE)阳性神经元百分比分别为42.83%±3.08%和43.32%±5.60%,均高于对照组27.48%±2.51%,但ATRA诱导分化组26.32%±3.62%与对照组比较无显著差异。(3)利用骨髓间质细胞作为饲