论文部分内容阅读
目的癌胚抗原(Carcinoembryonic Antigen, CEA)在大多数结肠癌组织中高表达。临床研究表明CEA与结肠癌病理分化程度及转移密切相关,主要用于肿瘤的早期诊断与恶性肿瘤复发的监测。CEA作为肿瘤标志物被广泛应用于临床,但其生物学功能目前尚未被完全了解。本文以结肠癌细胞系8307为研究对象,诣在从分子学角度探讨CEA在肿瘤发生发展过程中的生物学作用。方法本文应用RNA干扰技术抑制CEA在8307中的表达,研究其对8307细胞生物学功能的影响。依据siRNA设计原则,设计合成靶向CEA基因的特异性短发卡状RNA(shRNA),并克隆到pSilencer2.1-U6neo载体中,构建CEA shRNA表达载体pSilencer-shRNA-CEA,通过脂质体介导转染8307细胞。利用半定量RT-PCR及Western blot分别检测pSilencer-shRNA-CEA对CEA在mRNA水平及蛋白水平的干扰效率。MTT及克隆集落形成实验检测细胞增殖活性。侵袭实验检测CEA基因沉默对8307细胞侵袭性的影响。5-Fu是结肠癌化疗的常用药物,为检测CEA基因沉默后结肠癌细胞对5-FU敏感性的影响,利用G418筛选出稳定表达CEAshRNA的细胞克隆,MTT法分检测稳定表达CEAshRNA的8307细胞及对照组细胞中5-FU的抑制率。结果酶切鉴定结果显示重组质粒pSilencer-shRNA-CEA构建成功。构建的CEAshRNA表达载体pSilencer-shRNA-CEA明显抑制CEA在mRNA及蛋白水平的表达。MTT实验中CEA表达下调的8307细胞生长活性降低,与对照组相比抑制率达39%(p<0.05),细胞克隆集落形成能力也显著降低(p<0.05)。但侵袭实验结果显示CEA基因沉默后的8307细胞的运动侵袭能力较对照组明显增加。利用经G418筛选的稳定表达CEAshRNA的8307细胞系及对照组细胞分析CEA对5-FU敏感性的影响,通过MTT法检测药物抑制率,与对照组相比,结果表明：,表达CEAshRNA的8307细胞的5-FU抑制率明显增高,5-FU的IC50较对照组降低71%((p<0.05)。结论上述结果初步证明了构建的CEA shRNA表达载体能明显降低CEA的表达,并抑制结肠癌细胞的增殖活性,增加结肠癌细胞对5-FU的敏感性,但CEA表达下调增强了8307细胞的侵袭性。CEA对结肠癌细胞的生物学功能发挥着重要的调节作用。