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目的:目前的研究发现外源性VEGF165基因可以促进缺血组织血管新生,而多拷贝缺氧反应元件(Hypoxic Response Element,HRE)可以对VEGF165基因的表达进行调控减少其副作用;此外,多种形式的干/祖细胞也可以改善缺血组织的功能;然而多拷贝HRE调控VEGF165基因修饰的干细胞对缺血心肌中治疗性血管新生的作用目前仍不清楚。本研究通过把6HRE调控的VEGF165基因转染入内皮祖细胞中,来研究这种新的基因修饰的内皮祖细胞对心肌梗死后缺血心肌中血管发生以及对心肌梗死后心脏功能的治疗作用。方法:首先用分子生物学技术成功构建r6HRE-CMV-VEGF165重组质粒和rCMV-VEGF165重组质粒,并对体外分离培养的大鼠骨髓来源内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells, EPCs)进行免疫荧光法鉴定;然后用阳离子脂质体法将重组质粒转染到EPCs中,并构建体外细胞缺氧模型鉴定低氧启动子的调控作用;随后把基因修饰的EPCs通过尾静脉注射法移植入成功建立的急性心肌梗死(Acute Myocardial Infraction ,AMI)模型的Sprague- Dawley (SD)大鼠中,通过RT-PCR和Western 1blot法检测AMI后1w缺血心肌中VEGF165 mRNA和蛋白质的表达水平,用免疫组化法和超声心动图检测AMI 4w后大鼠缺血心肌中毛细血管密度和心脏功能。结果:1)阳离子脂质体法可有效的将重组质粒转染入体外分离培养的骨髓来源大鼠EPCs;2)6HRE-CMV低氧启动子诱导VEGF165基因在体内外缺氧时表达增强,而非缺氧下仅呈现低水平表达;3)r6HRE-CMV-VEGF165质粒转染EPCs移植组中大鼠AMI后1w VEGF165基因的表达水平以及4w缺血心肌中毛细血管密度明显高于rCMV-VEGF165质粒转染EPCs移植组和EPCs移植组(P<0.05);4) r6HRE-CMV-VEGF165质粒转染EPCs移植组大鼠左室舒张末压显著低于其它各实验组(P<0.05),而左心室射血分数显著高于其它各实验组(P<0.05)。结论:6HRE调控下VEGF165基因修饰后的EPCs移植与VEGF165基因修饰后的EPCs移植和单纯EPCs移植相比促进缺血心肌血管新生、改善AMI后大鼠心脏功能作用更显著。