化州橘红种质资源的分子评价及其类黄酮主要成分含量的分析

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化州橘红属于芸香科柑橘属柚类(Citrus grandis Osbeck)变种化州柚(Citrus grandis Osbeck var. tomentosa Hort.),入药成分为未成熟或近成熟果实的干燥外果皮。其主产于广东省化州市,果实较小,果肉酸苦。化州橘红有正毛、负毛、假西洋和光青(均为当地俗称)之分,其中正毛药效最好。化州橘红的类黄酮主要是柚皮苷和野漆树苷,由于化州橘红有着止咳,抗炎等作用,所以在临床上有广泛的作用。本实验在前人的研究基础上,以化州橘红为主要试验材料,研究不同种质之间的亲缘关系;同时,利用高效液相色谱(HPLC)分离分析了不同种质之间的类黄酮主要药用成分的含量,分析结果如下。1、利用SSR分子标记技术对化州橘红各种质进行分子评价。从120对引物中筛选出25对多态性较好的引物,共扩增出176条清晰条带,其中多态性条带有175条,多态率达99.43%。结果表明,化州橘红与柚类亲缘关系较近,证实了化州橘红属于柚类;但也发现不同果园的同一种质(如正毛)遗传差异明显,这可能与当地大量采用实生繁殖有关,证明当地同名种质在遗传背景上的异质性。2、优化了化州橘红类黄酮的提取方法;建立了HPLC分析化州橘红柚皮苷和野漆树苷含量的方法。具体为:用0.3%甲酸水溶液为流动相A,色谱纯甲醇为流动相B,使用Waters Symmetry C18色谱柱,流速1mL/min条件下,以梯度洗脱的方式进行分析,两种黄酮标样可以达到基线分离。结果表明该方法的稳定度、精密度和加标回收率均符合要求,说明方法可行。3、利用上述方法,测定了2011年和2012年的化州橘红幼果的类黄酮含量。结果表明,化州橘红中柚皮苷和野漆树苷显著高于其它柚类。同时发现,种植在不同果园同一种质的类黄酮含量有显著差异,其中负毛(黎果园)的柚皮苷含量特别高,这可能与果园土壤元素含量、栽培管理技术等生长环境有关。4、利用HPLC测定了果实生长发育期间正毛(吴果园)和假西洋(吴果园)的类黄酮变化。结果表明,在果实生长发育期间,果皮和果肉中的柚皮苷和野漆树苷的含量均呈下降趋势;对于果实不同组织来说,果肉(含囊衣)的柚皮苷含量显著高于果皮(干重),野漆树苷的含量显著低于果皮(干重)。
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