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目的:探讨PI3K/AKt/mTOR信号通路的上下游相关细胞因子、蛋白在土家族麝针疗法干预缺血性脑中风SD大鼠前后的释放量及表达水平的变化,初步揭示土家族麝针疗法治疗缺血性脑中风的作用机制,尤其是与运动功能及认知功能相关的作用环节和靶点。方法:采用改良线栓法复制缺血性脑中风SD大鼠模型,将Zea-longa评分1~3分的模型大鼠随机分为模型对照组、土家族麝针组和针刺对照组,另取正常SD大鼠参照改良线栓法同法手术但不行栓塞处理,作为假手术组,每组30只。土家族麝针组以自制麝针以捻针法刺激大鼠对侧头皮运动区肌层,以200r/min以上的速度快速捻针,至针刺区微微有发热感,捻针5min后留针5min,反复捻针留针3次后起针,每日1次,5天为一疗程,每疗程间休息两天,持续治疗3个疗程;针刺对照组同法同位置以普通毫针刺激,模型对照组和假手术组不给予任何处理。分别于治疗前及治疗1、2、3疗程结束后每组随机取6只大鼠,采用平衡木实验测试各组大鼠的运动功能;于2疗程治疗后每组随机选取6只大鼠,进行Morris水迷宫行为学测试检测其记忆功能;于3疗程结束后取各组大鼠脑组织做HE染色病理切片,观察脑组织病理改变情况。取治疗前及治疗3疗程后各组大鼠血浆,用ELISA法检测其中IL-6、IL-1β的含量;取治疗3疗程后的大鼠脑组织固定、切片后,利用双光子激光共聚焦显微成像系统采集皮层区小胶质细胞突起的图像、采用Image J进行小胶质细胞突起进行骨架化分析,采集小胶质细胞总突起数目、突起总长度。在治疗3疗程后,取各组大鼠血浆和脑组织,采用ELISA法检测血浆中VEGF、HIF-1α的含量,Western-Blot法检测脑组织中PI3K、AKt、mTOR蛋白表达。结果:平衡木测试结果显示,治疗前,与假手术组比较,其他各造模组平衡木测试评分显著降低(P<0.05),且造模组之间无显著性差异(P>0.05);随着疗程增加,各造模大鼠平衡木测试评分显著增加,且在第3疗程评分土家族麝针组>针刺对照组>模型对照组(P<0.05)。水迷宫测试结果显示,治疗后,与模型对照组比较,各治疗组记忆功能具有明显差异(P<0.05),其中土家族麝针组记忆功能更接近于假手术组。镜下观察大鼠海马区神经元结果显示,缺血性脑中风后的大鼠脑组织神经元细胞排列紊乱,数量明显减少,且结构不完整,出现大量神经元细胞坏死以及空泡现象;经过土家族麝针治疗后,脑组织神经元细胞排列基本整齐,胞膜结构完整,形态基本接近于假手术组。小胶质细胞突起结果显示,治疗后,与假手术组相比,模型对照组大鼠小胶质细胞的突起总数目和总长度均显著下降(~aP<0.05);给予土家族麝针疗法治疗后其突起总数目和突起总长度均显著增加(~bP<0.05),而针刺疗法能显著增加突起总长度(~bP<0.05),对突起总数目无显著的影响(~bP>0.05)。血浆中IL-6、IL-1β含量测定结果显示,治疗前,与假手术组相比,各造模组大鼠血浆中IL-6、IL-1β的含量显著升高(~aP<0.05)且无明显差异(~bP>0.05,~cP>0.05)。经过3个疗程治疗后,与假手术组比较,各组大鼠血浆中IL-1β、IL-6的含量均有显著降低(~aP<0.05,~△P<0.05);与模型对照组比较,土家族麝针组血浆中IL-6、IL-1β的含量显著降低(P<0.05),针刺对照组血浆中IL-6显著降低(~bP<0.05),而IL-1β的含量无显著性差异(~bP>0.05)。血浆中HIF-1α、VEGF含量测定结果显示,治疗前,与假手术组相比,各造模组大鼠血浆中HIF-1α、VEGF的含量显著升高(~aP<0.05)。经过3个疗程治疗后,模型对照组大鼠血浆中HIF-1α、VEGF的含量升高(~△P<0.05);与模型对照组比较,土家族麝针组以及针刺对照组血浆中HIF-1α、VEGF的含量均显著升高(~△P<0.05,~b P<0.05)。脑组织中PI3K、AKt、mTOR蛋白表达结果显示,治疗前,与假手术组比较,其余各组海马组织中PI3K蛋白表达显著降低(~aP<0.05),AKt蛋白表达显著降低(~aP<0.05),mTOR蛋白表达显著升高(~aP<0.05);随着疗程的增加,与模型对照组比较,土家族麝针组大鼠海马组织中PI3K蛋白表达呈逐渐升高趋势(~bP<0.05,~▲P<0.05,~△P<0.05,~●P<0.05),AKt蛋白表达呈逐渐升高趋势(~bP<0.05,~▲P<0.05,~△P<0.05,~●P<0.05),mTOR蛋白表达在治疗1、2疗程后变化不明显(~bP<0.05,~▲P>0.05,~△P>0.05),但在治疗3疗程后有下降的趋势(~●P<0.05)。结论:缺血性中风发生后,大鼠出现明显的运动功能降低、记忆认知能力显著下降的现象,其发生可能与缺血缺氧导致血浆中IL-6、IL-1β、VEGF、HIF-1α的含量增加,海马组织中PI3K、AKt蛋白的表达降低,mTOR蛋白表达增加引起的脑组织神经元坏死有关。土家族麝针疗法对缺血性脑中风大鼠的运动功能和记忆认知能力具有显著的改善作用,其“活血化瘀生新”的作用机制可能与降低促炎细胞因子IL-6、IL-1β的含量;并激活PI3K/AKt/mTOR信号通路,增加血浆中VEGF、HIF-1α的含量,促进新生血管形成;调节MCAO大鼠细胞内分子开关,减少小胶质细胞向M1型转化,进而降低神经毒性,改善脑组织炎症反应,从而促进缺血性脑中风的恢复有关。