【摘 要】
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大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,常用的手术、化疗、放疗等传统的治疗方式均未能使其疗效得到明显的提高。自九十年代以来,肿瘤基因治疗已成为最引人瞩目的研究领域。白介素
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大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,常用的手术、化疗、放疗等传统的治疗方式均未能使其疗效得到明显的提高。自九十年代以来,肿瘤基因治疗已成为最引人瞩目的研究领域。白介素12(IL-12)具有潜在的抗肿瘤与抗转移活性,它的许多生物特性均与抗肿瘤免疫有关,如增强辅助T细胞效应、抗血管新生作用、释放粘附因子吸引淋巴细胞围攻肿瘤。为此我们构建含有HSV-tk,hIL-12基因的共表达逆转录病毒载体;研究HSV-tk/IL-12系统对大肠癌细胞的杀伤作用。利用重组DNA技术,构建含HSV-tk、hIL-12基因的共表达载体pL(TI)SN。在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选出抗性克隆LoVo/TI,以PCR、RT-PCR、SDS-PAGE、western-blot、免疫组化等对HSV-tk/IL-12系统修饰的LoVo细胞进行鉴定。通过观察基因修饰细胞生长状况、MTT法及流式细胞仪观察GCV对LoVo/TI细胞的杀伤效应。在体外,GCV体外可诱导LoVo/TI细胞凋亡,且凋亡百分率随GCV作用时间的增加而升高;经GCV作用后的LoVo/TI细胞,阻滞于S期;大肠癌细胞LoVo对GCV系统高度敏感。HSV-TK/GCV系统对体内其他部位未转染HSV-TK基因大肠癌细胞产生远距离旁观者效应明显。经过50GyCo60对LoVo/TI细胞照射后,与其亲代细胞相比增殖指数下降、凋亡率上升,出现了明显的G1期阻滞,体外培养过程中其目的基因IL-12仍然有转录,但是转录产物的量呈递减趋势。制备的LoVo/TI细胞瘤苗在动物实验中不具有致瘤性,产生IFN-γ的量较未照射的LoVo/TI细胞没有明显差别。初步证实,皮下接种LoVo/TI细胞瘤苗可以抑制移植LoVo细胞肿瘤的生长。
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