【摘 要】
：
目的:通过制备一种由壳聚糖水凝胶包裹,携带TGF-β3生长因子和终板软骨脱细胞基质,复合干细胞进行终板软骨的组织工程修复实验。方法:体外实验部分:分离SD大鼠腹股沟脂肪,采取酶消化法获得原代大鼠脂肪间充质干细胞,将获得的脂肪干细胞进行流式细胞学鉴定;胰酶消化传代细胞后进行扩增培养,加入成骨,成脂、成软骨三系诱导培养基进行诱导相应天数后,使用茜素红,油红O和番红染色,观察细胞本身的多向分化能力;分离
论文部分内容阅读
目的:通过制备一种由壳聚糖水凝胶包裹,携带TGF-β3生长因子和终板软骨脱细胞基质,复合干细胞进行终板软骨的组织工程修复实验。方法:体外实验部分:分离SD大鼠腹股沟脂肪,采取酶消化法获得原代大鼠脂肪间充质干细胞,将获得的脂肪干细胞进行流式细胞学鉴定;胰酶消化传代细胞后进行扩增培养,加入成骨,成脂、成软骨三系诱导培养基进行诱导相应天数后,使用茜素红,油红O和番红染色,观察细胞本身的多向分化能力;分离大鼠尾椎终板软骨,使用SDS溶液浸泡24小时进行脱细胞处理后获得大鼠尾椎终板软骨脱细胞基质,DAPI染色观察终板软骨组织脱细胞情况;扫描电子显微镜观察脱细胞基质形态;使用免疫荧光、甲苯胺蓝、番红O染色观察鉴定脱细胞基质相应成分;将终板软骨脱细胞基质粉碎后溶于醋酸溶液,与醋酸溶的壳聚糖溶液进行混合,酸碱滴定调至中性,使用钴60消毒后,加入细胞生长因子TGF-β3,再加入交联剂进行交联,观察其大体特点:将制备得到的水凝胶浸泡在DMEM-1X培养基中,分别在1d,3d,5d,7d,14d,21d时间节点取浸提液用于后续实验;将获得的脂肪间充质干细胞接种到水凝胶与水凝胶浸提液上,使用CCK-8检测脂肪干细胞在水凝胶与水凝胶浸提液中的增殖情况,并与寻常培养基培养的脂肪干细胞进行对照,从细胞层面判断水凝胶的生物学相容性与细胞毒性;取1d,3d,5d,7d,14d,21d取水凝胶的浸提液,使用针对TGF-β3的ELISA试剂盒进行检测,分析水凝胶中细胞因子的释放动力;将获得的脂肪干细胞接种在制备好的水凝胶上后进行培养,分别在3d,5d,7d取小块水凝胶进行死活染色,并使用双光子共聚焦显微镜进行三维重建,分析细胞在水凝胶中的立体排布,三维生长分布趋势;将获得的P2代脂肪间充质干细胞种植在水凝胶中,共培养后使用PCR技术分别检测成软骨特性基因的表达情况,与不加入TGF-β3的水凝胶作为对照,分析干细胞在水凝胶中的成软骨分化的倾向。体内实验部分:将复合水凝胶分为携带TGF-β3复合细胞的水凝胶组,单纯携带TGF-β3的水凝胶组,单纯细胞组和空白对照组,采取同体对照的方法,制造大鼠尾椎间盘针刺模型,沿椎骨与椎间盘间隙针刺每节椎间盘的上层终板软骨,同时将注射液植入终板软骨中,同一大鼠操作相邻的四节椎间盘,使注射液在大鼠体内完成交联。分别在术后2W,8W进行取材,并采取HE、Masson三系染色,评估对于终板软骨的修复效果的效果。结果:1.分离培养出的大鼠脂肪间充质干细胞呈长梭形,生长良好且三系诱导分化染色呈阳性结果;2.DAPI染色结果显示脱细胞处理结果良好,扫描电镜下胶原纤维交错排列,提供良好的细胞生长增殖间隙;免疫荧光、甲苯胺蓝和番红O染色证明终板软骨基本成分为Ⅰ型、Ⅱ型胶原和糖胺聚糖等;3.CCK-8定量检测脂肪干细胞种植后活动略高于正常培养组（P<0.05）,且浸提液培养组与正常培养组的细胞活性基本相同;4.细胞因子释放动力学Elisa结果显示浸提液中的细胞因子在7d-14d左右达到顶峰;死活染色显示复合水凝胶提供适宜细胞生长的微环境,细胞可以在水凝胶中增殖和分化;PCR检测结果显示,携带TGF-β3的终板软骨脱细胞基质/壳聚糖水凝胶组检测到的软骨特异性基因相对表达较高,证明其具有成软骨向诱导的潜质。5.动物体内实验显示,携带TGF-β3复合细胞的水凝胶组修复效果与单纯携带TGF-β3水凝胶组、单纯细胞组和空白对照组相差不大,特殊染色结果呈现阴性。结论:终板软骨脱细胞基质具有良好的三维空间结构,以此为基础制备的水凝胶具有良好的生物相容性,可以促进种子细胞的增殖和相关基因的表达,有利于种子细胞的黏附和增殖;但是以此种水凝胶以期修复终板软骨的体内试验结果阴性。
其他文献
以CGSS2015数据为研究样本,构建了社会资本通过社会经济地位和社会治理满意度的中介作用影响城市居民主观幸福感的结构方程模型,并进行了检验。结果表明:（1）社会网络、社会信任、社会经济地位和社会治理满意度均对主观幸福感有正向影响,但社会规范对主观幸福感有抑制作用;（2）社会网络、社会信任和社会经济地位均对社会治理满意度有正向影响;（3）社会信任对社会经济地位有正向影响;（4）社会经济地位在社会信
目的:通过生物信息分析学理论与技术方法联合使用相关基因数据库,对TCGA数据库中差异表达的乳腺癌基因进行筛选及统计学处理,得到与患者生存预后相关的基因并据此构建多基因预后模型。获取患者多基因模型评分并纳入患者临床病理信息,构建联合预后模型,从中提取独立预后因子建立乳腺癌预后列线图供临床参考。通过GSEA富集分析、相关基因库查询及文献检索,为乳腺癌患者找出可能的治疗新靶点与预后新标记物提供新思路。方
以新冠肺炎为例研究突发公共卫生事件不同阶段公众应对行为产生机制并提出针对性引导策略，对于突发公共卫生事件的应急管理具有重要意义。采集疫情期间热点微博及其评论文本，借助Python初步处理数据，利用扎根方法对数据进行开放式编码、主轴编码和选择性编码。研究发现，在突发公共卫生事件初、中、后期三个阶段，公众行为主要呈现出“风险规避—风险应对与群际行为—前景判断决策”的规律，各阶段的引导侧重点应落在“信息
目的:通过实验病理学研究,观察CD31分子在主动脉夹层形成中的病理学改变及其潜在作用机制。方法:通过收集2018年3月-2020年12月安徽皖医司法鉴定中心10例心源性猝死（主动脉夹层）案例和皖南医学院第一附属医院弋矶山心血管外科收治入院的15例行主动脉血管修补术或置换术的主动脉夹层患者作为研究对象,同时收集相同时期安徽皖医司法鉴定中心死亡原因为心源性猝死（冠心病,高血压等非主动脉夹层案例）作为阴
随着乡村旅游的快速发展,游客消费需求的不断升级,迫使一大部分乡村民宿由中低端向精品转型。在乡村民宿转型的过程中,无论经营管理,还是服务品质,都会存在不同程度的问题。本文以安徽黄山地区的民宿为例,分析其发展现状,针对经营中的资源整合程度、管理人才、一线岗位技能培训、服务产品与服务方式等方面问题,提出相应的解决措施,以期提高民宿运营能力,进而提升当地精品民宿品牌竞争力。
目的:了解皖南医学院全科医学定向本科生对课程质量及培养现状的满意度,为教学改革提供依据,从而提升我校全科医学教学质量。方法:选取我校全科医学专业定向本科三年级至五年级的全部学生（即2017级、2016级及2015级学生）及部分已经毕业的学生共185人作为调查对象并发放电子问卷,对全科医学专业本科教学质量满意度进行调查;问卷按照国内外教学满意度的问卷结构结合我校全科教学的特点进行设置,并组织专家对问
目的:分析常用的红细胞压积（Hematocrit,HCT）、白蛋白（Serum Albumin,ALB）等指标与患者感染以及严重程度间的相关性,并评价其在预测患者感染以及感染预后中的价值。方法:随机选取于2020年9月至2021年8月安徽省马鞍山十七冶医院收治的慢性肾脏病5期行血液透析的患者（共150人）,将其分为观察组与对照组（各75人）。取收住入院第一次未输血制品时化验抽取的血标本结果记为HB
目的:吲哚胺2.3-双加氧酶1（IDO1）是催化L-色氨酸沿“犬尿氨酸途径”分解代谢的限速酶,通过色氨酸代谢调控肿瘤免疫微环境,并在多种人源肿瘤中高表达。硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）也高表达于多种肿瘤中,并通过活性氧（ROS）调控肿瘤免疫微环境。本项目设计合成了第一代IDO1和TrxR1双靶抑制剂（苗头化合物ZC0101）,并探索其靶向IDO1和TrxR1的协同抗肿瘤作用及机制,希望为抗肿瘤药
目的:氯吡格雷是临床应用较多的一种强效抗血小板药物,手术前停用氯吡格雷的最佳时机仍存在争议。当前的指南建议在手术前5-7天停用氯吡格雷,但是尚无确凿证据表明该方案对于非心脏手术的患者可以受益。指南建议的时间窗是在未监测患者血小板功能的情形下形成的,实际上我们并不清楚在高危患者中停用氯吡格雷5-7天是否会增加血栓事件风险。本研究首先应用血栓弹力图（Thrombelastography,TEG）评价氯
目的:基于非色素生物分子环烯醚萜化合物京尼平（Genipin）和具有抗肿瘤生物活性的酪色亮肽（YSL）以及经两个甘氨酸修饰的酪色亮肽（GGYSL）构建具有光热转化性能的超分子纳米颗粒,验证其理化性质、稳定性和生物安全性进一步用于肝癌的光热治疗,同时探究肽自身抗肿瘤活性是否保留。方法:1.GYSL-NPs与GGGYSL-NPs的合成:采用简单的水热法将京尼平分别与YSL和GGYSL共价交联并自组装形