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第一章缺氧对ARPE-19细胞表达TGF-β2、VEGF、PEDF及TSP-1的影响目的:探讨缺氧诱导人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial,RPE）细胞株（ARPE-19）表达转化生长因子—β2（transforming growthfactor-β2,TGF-β2）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor,VEGF）、色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor,PEDF）及血小板反应蛋白—1（Thrombospondin-1 TSP-1）的情况。方法:含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养ARPE-19细胞,加入150umol/mlCoCl2进行化学缺氧,细胞免疫荧光染色及WesternBlot技术检测ARPE-19细胞在缺氧0h、4h、8h、12h、24h、48h,TGF-β2、VEGF、PEDF及TSP-1的表达情况。结果:1.细胞免疫荧光染色ARPE-19细胞胞浆表达VEGF蛋白,随缺氧时间的延长表达增强,以缺氧24小时最为显著;ARPE-19细胞胞浆表达PEDF蛋白,随缺氧时间的延长表达减弱;ARPE-19细胞胞浆、胞膜、核膜及核仁均有TSP-1及TGF-β2蛋白的表达,随缺氧时间的延长表达减弱。2.Western Blot技术检测ARPE-19细胞缺氧组表达VEGF随时间延长表达较常氧对照组明显增加,以24小时达高峰,缺氧组为常氧组的2.6倍,此后有所下降,缺氧与常氧组除0小时外（P=0.935）,其它各时间点差异均有统计学意义（P=0.000-0.002）;表达PEDF、TSP-1及TGF-β2缺氧组较常氧对照组明显减少,48小时缺氧组分别为常氧组的0.30倍、0.35倍及0.28倍,缺氧与常氧组除0小时外（P=0.125）、（P=0.803）、（P=0.086）,其它各时间点差异均有统计学意义（P=0.000-0.014）、（P=0.000-0.003）、（P=0.000-0.001）。3.缺氧不同作用时间APRE-19表达PEDF、TGF-β2与TSP-1成正相关（r=0.902,P=0.000）、（r=0.990,P=0.000）;缺氧不同作用时间APRE-19表达VEGF与TSP-1成负相关（r=-0.853,P=0.000）。结论:1.缺氧启动血管新生可能通过ARPE-19细胞表达促血管生成因子VEGF的增加及抗血管生成因子PEDF、TSP-1及TGF-β2的减少实现。2.TSP-1不同于作为血管生成正向作用因子的VEGF,可能与PEDF及TGF-β2一同作为血管生成的负向作用因子参与血管新生性疾病的发生发展。第二章VR-10合成多肽对恒河猴脉络膜视网膜内皮（RF/6A）细胞的作用目的:探讨VR-10合成多肽对猴脉络膜视网膜内皮细胞株（RF/6A细胞）增生、移行的作用及对TGF-β2、VEGF、PEDF表达的影响。方法:MTT法检测1μg/ml外源性TSP-1及0.1μg/ml、1μg/ml及10μg/ml的VR-10合成多肽在作用6、12、24、48小时后对RF/6A细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测作用24小时后对细胞移行的影响;细胞免疫荧光染色及RT-PCR技术检测对RF/6A细胞表达TGF-β2、VEGF、PEDF的影响。结果:1.MTT法检测不同浓度和时间TSP-1及VR-10合成多肽作用RF/6A细胞存活率:TSP-1及VR-10合成多肽对RF/6A细胞均有抑制作用,且随作用时间及浓度的增加,细胞存活率越低。以作用48小时VR-10合成多肽10μg/ml组细胞存活率最低为78%（P＜0.001）。2.Transwell小室实验中TSP-1及VR-10合成多肽对RF/6A细胞迁移具有抑制作用（P＜0.001）;以10μg/ml的VR-10合成多肽抑制率最高,1μg/ml TSP-1全肽抑制率次之。VR-10合成多肽随浓度增加抑制率越高（P＜0.001）;0.1μug/ml的VR-10合成多肽与1μg/ml的VR-10合成多肽对RF/6A细胞的抑制率差异无明显统计学意义（P=0.114）。3.细胞免疫荧光染色RF/6A细胞胞浆表达TGF-β2蛋白,1μg/mlTSP-1处理RF/6A细胞表达TGF-β2较空白对照组强,各浓度VR-10合成多肽处理RF/6A细胞表达TGF-β2与空白对照组比较无明显差别;RF/6A细胞胞浆表达PEDF蛋白,TSP-1及VR-10合成多肽处理RF/6A细胞表达PEDF均较空白对照组表达增强,以10μg/ml浓度组VR-10合成多肽作用最强;RF/6A细胞胞浆表达VEGF蛋白,TSP-1及VR-10合成多肽处理RF/6A细胞表达VEGF均较空白对照组表达减弱,以10μug/ml浓度组VR-10合成多肽作用最强。4、RT-PCR检测除1μg/ml浓度TSP-1组处理RF/6A细胞表达TGF-β2 mRNA较空白对照组表达增强外（P=0.000）,其余各组均与空白对照组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;PEDF mRNA均较空白对照组表达增强,以10μg/ml浓度组VR-10合成多肽作用最强（P＜0.001）,各组间比较差异有统计学意义（P＜0.001）:VEGF mRNA均较空白对照组表达减弱,以10ug/ml浓度组VR-10合成多肽作用最强（P＜0.001）,除1μg/ml浓度组VR-10合成多肽与1μg/mlTSP-1多肽组间比较差异无统计学意义外（P=0.615）,其余各组间比较差异有统计学意义（P＜0.001）。结论:1.VR-10合成多肽具有抑制内皮细胞增殖、移行的作用。2.VR-10合成多肽通过上调抗血管生成因子PEDF,下调促血管生成因子VEGF的表达,及TGF-β2非依赖机制,共同作用而抑制血管新生。第三章VR-10合成多肽对RF/6A细胞表达Fas/FasL、Caspase-3及Bcl-2的影响目的:探讨VR-10合成多肽对RF/6A细胞凋亡相关基因表达的影响。方法:RT-PCR技术检测10μg/ml的VR-10合成多肽及空白对照组对RF/6A细胞表达Bcl-2及FasL mRNA的影响。Western Blot技术检测10μg/ml的VR-10合成多肽及空白对照组对RF/6A细胞表达Fas及Caspase-3蛋白的影响。结果:1.RT-PCR检测RF/6A细胞表达Bcl-2 mRNA,10μg/mlVR-10合成多肽处理组较空白对照组表达减少（P=0.000）,RF/6A细胞表达FasL mRNA,10μg/mlVR-10合成多肽处理组较空白对照组表达增强（P=0.001）。2.WB检测空白对照组RF/6A细胞表达Caspase-3蛋白大多为无活性酶原形式（32KD）;10μg/ml VR-10合成多肽处理RF/6A细胞主要表达Caspase-3活性小分子片段（20KD）;10μg/ml VR-10合成多肽处理RF/6A细胞表达Fas蛋白较空白对照组增加（P=0.000）。结论:VR-10合成多肽通过增加凋亡促进基因Fas/FasL而活化Caspase-3,同时伴有生存基因Bcl-2的减少,共同作用介导内皮细胞凋亡。