多粘类芽胞杆菌HY96-2是笔者所在实验室从番茄根际分离得到的一株生防菌,目前已成功创制出以HY96-2为活性成分的系列微生物农药。针对HY96-2产多糖的功能、结构及其在培养过程中的产生规律尚不明晰等问题,本文首先对HY96-2产胞外多糖的粗提物对海洋芽孢杆菌的热保护与助悬浮等功能进行了研究,然后对其进行分离纯化并对其结构进行探索;最后对多粘类芽胞杆菌HY96-2产多糖的放大规律进行研究,并对其发酵工艺进行了进一步的优化。HY96-2胞外粗多糖对海洋芽胞杆菌B-9987具有明显的热保护作用。在相同条件下,添加0.5%粗多糖后B-9987营养细胞的存活率比空白对照提高了 14.06%,B-9987芽胞存活率比空白对照提高了 15.68%。在喷雾之前加入0.5%粗多糖,亦可使海洋芽胞杆菌制剂的活菌含量比空白对照提高30.43%。向未粉碎和已粉碎海洋芽胞杆菌制剂中按25%的比例添加HY96-2胞外粗多糖,可使其悬浮率比空白对照分别提高3.21%和18.79%。在喷雾之前加入0.5%粗多糖,亦可使海洋芽胞杆菌制剂的悬浮率比空白对照提高5.81%。经乙醇沉淀、sevag法去蛋白、透析、DEAE-52离子交换柱等手段,纯化了 HY96-2胞外多糖,其中多糖组分B为91.39%。采用GPC、GC色谱等分析方法测定了多糖组分B的分子量,组分B主要由分子量为1.22×106道尔顿的多糖组成;进而对组分B的单糖组成进行了分析,确定其含有5种糖基:鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖;其摩尔比为:2.52:0.25:1:1.61:2.24。经5L、500L、5000L发酵罐逐步放大,至发酵末期,发酵液中多糖含量分别达到6.8g/L、8.2g/L 和 8.6g/L。为进一步提高多糖产量,经过单因素实验和正交实验,优化了 HY96-2高产胞外多糖的培养工艺:碳源为2%的葡萄糖,氮源为1%的花生饼粉,发酵温度为32℃。经5L发酵罐验证,培养至36h,优化后的多糖产量为19.86g/L,比优化前培养工艺的多糖产量提高1.91倍。