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核酸适配体是通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)筛选得到的一段具有识别作用的单链寡核苷酸片段,可为ssDNA和RNA。核酸适配体能够通过折叠形成特定的二级和三级结构与靶标高亲和力(μmol/L-pmol/L)高特异性结合。利用适配体技术开发的检测方法包括比色法、荧光法、电化学法等多种方法。其中荧光法具有简单、快速、易于自动化的特点,其有效性已被广泛证实。目前已经利用适配体开发了众多的荧光检测方法,但是大部分的荧光法需要对适配体进行修饰,这些操作费时并且分析成本较高,甚至有可能因为适配体上修饰了荧光基团或者淬灭基团而影响适配体与靶标结合的特性,从而降低检测的灵敏度。因此,本研究利用适配体和荧光染料开发了快速、灵敏、简单的非标记型荧光法,能够应用于食品中毒素的检测,对于保障食品安全有着重大的意义,主要内容包括以下三部分。(1)利用荧光染料PicoGreen能够嵌入适配体与互补序列形成的dsDNA,从而引起荧光强度改变的特性开发了一种简单的通用型非标记荧光法,可高灵敏度高特异性的检测无机离子、蛋白质及小分子。通过优化PicoGreen染料的用量和检测时间,该方法对钾离子检测的检测限达到1 μmol/L,线性范围为1μmol/L-1mol/L;在10mmol/L、100mmol/L、200 mmol/L的钠离子存在的条件下,1 μmol/L-1 mol/L线性范围仍然能够实现对钾离子的检测；该方法与原子吸收光谱法分别对尿样中钾离子含量进行检测,用荧光法测得的钾离子的浓度平均是原子吸收光谱法测得的钾离子浓度的87±6%。对凝血酶检测限为10 U、线性范围10-1000 U；将1 mg/mL的牛血清白蛋白分别添加到不同浓度的凝血酶溶液中进行试验,凝血酶浓度与F/F0之间仍然具有非常好的相关性(r=-0.9805)。对腺苷检测限达到0.5 μmol/L,线性范围0.5 μmol/L-5 mmol/L;在稀释20倍的胎牛血清样品中检测腺苷,检测限为0.5 μmol/L,线性范围0.5μmol/L-5 mmol/L。(2)利用构建的基于适配体和PicoGreen染料的非标记荧光法对赭曲霉毒素A(OTA)进行检测,在优化好的条件下,OTA检测限达到1 ng/mL,线性范围1ng/mL-100μg/mL,特异性检测中,分别用非特异性靶标玉米赤霉烯酮、N-乙酰基-L-苯丙氨酸以及无关适配体(氯霉素适配体)进行试验,结果显示荧光强度并无明显变化,证明该方法对于OTA的检测具有非常高的特异性；并且将检测方法应用于缓冲液稀释为1%的啤酒当中,能够检测到低至1 ng/mL的OTA,线性范围1 ng/mL-100 μg/mL。(3)利用1,3,8,10-四氢-N,N,N,N’,N’,N’-六甲基-1,3,8,10-四氧代-蒽[2,1,9-def.·6,5,10-d’e’f]二异喹啉-2,9-二丙胺二碘化物(PTCDI)染料建立了凝血酶非标记荧光法检测法。设置PTCDI染料的浓度分别为5 nmol/L,50nmol/L, 500 nmol/L,1μmol/L,2μmol/L,5μmol/L,10μmol/L进行优化,设置5 μmol/L的适配体体积为5 μL、10μL、15μL、20μL进行优化,结果表明,在PTCDI染料浓度为500nmol/L,凝血酶适配体(5μmol/L)20 μL的条件下对凝血酶进行检测最佳。检测限达到40 pmol/L,线性范围40-1600 pmol/L;特异性检测中,相同浓度的牛血清白蛋白,溶菌酶,小鼠免疫球蛋白G代替凝血酶进行试验,均不会引起荧光强度明显的变化,充分证明该方法对于凝血酶的检测具有非常高的特异性。