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在水产养殖中,传统的过于依赖抗生素等化学药物的疾病防治措施容易引起耐药性微生物增加、环境污染和鱼体药物残留等严重后果。研究与开发更为高效、安全的抗生素替代品已成为当今的研究热点之一。抗菌肽(Antimicrobial peptides, AMP)是微生物、动植物及人体等产生的具有抗菌活性的短肽物质,被认为是宿主防御系统第一防线的一个主要组成。抗菌肽不仅抗菌活性强、抗菌谱广、合成和杀菌速度快,而且不易诱导抗药菌株的产生,在替代传统抗生素方面有着巨大潜力,有望成为新一代的抗菌制剂。本文通过酸粗提、固相萃取、Sephadex G-25柱凝胶层析和RP-HPLC相结合的方法从大黄鱼(Pseudosciaena crocea)胃肠组织中分离纯化抗菌肽,研究结果表明大黄鱼胃肠组织中存在着多种抗菌物质,并最终得到了分子量小于5000Da的两个小分子抗菌肽——AMP-W2和AMP-W3。通过氨基酸分析仪对两者进行了初步分析,其氨基酸组成可能为Lys, Gly, Ala, His, Val, Leu, Phe, Tyr, Trp,Thr, Ser和Asp, Glu, Gly, Val, Ser, Tyr, Cys, Ala, Thr, Ile, Leu, lys。确切的分子量及氨基酸序列有待于进行进一步的实验研究。本文以大黄鱼致病菌——溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus,ND-01)为指示菌,用琼脂扩散法测定所纯化的抗菌肽的抗菌活性,发现AMP-W2和AMP-W3对溶藻弧菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为5.0μg/ml和1.25μg/ml左右;两者在弱酸性条件下(pH=5.5-7.0)的抗菌活性高于弱碱性条件(pH=7.0-9.0);对人血红细胞的最低溶血浓度分别为2.5μg/ml和10μg/ml;抗菌谱检测结果表明这2种抗菌肽都能广泛抑制革兰氏阳性细菌,革兰氏阴性细菌和真菌,但对真菌的抑制作用较小。本文是首次从鱼类胃肠组织中分离得到抗菌肽,有助于更全面了解鱼类抗菌肽的抗菌机理及抗感染免疫。同时,本文采取人工合成大黄鱼抗菌肽cDNA序列,设计特异性的引物,经PCR扩增后得到大黄鱼的基因序列AH。将此基因克隆至载体pGEX-4X-3,成功构建了重组质粒GST-AH。转化大肠杆菌BL21,采用低温诱导方法,使目的融合蛋白在细胞内减速转译,形成可溶性蛋白。实验确定诱导条件为:温度25℃,0.8mM IPTG诱导6h,融合蛋白大部分以可溶性蛋白形式高效表达。经SDS-PAGE谱带灰度扫描的分析表明,融合蛋白可达细菌全蛋白总量的42%。