【摘 要】
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党参(Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.)作为甘肃省主要的道地药材之一,是甘肃省中医药产业重要支柱。党参多糖(codonopsis polysaccharides,CPPs)是其主要成分之一,党参炔苷(Lobetyolin)在《中国药典》2015年版中被作为特征成分用于鉴别党参。大量研究表明诱导子在植物的生长代谢、抗病害能力及活性代谢产物合成积累中发挥着重要作用。
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党参(Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.)作为甘肃省主要的道地药材之一,是甘肃省中医药产业重要支柱。党参多糖(codonopsis polysaccharides,CPPs)是其主要成分之一,党参炔苷(Lobetyolin)在《中国药典》2015年版中被作为特征成分用于鉴别党参。大量研究表明诱导子在植物的生长代谢、抗病害能力及活性代谢产物合成积累中发挥着重要作用。真菌诱导子可以作为有效的生物菌肥被应用于中药的绿色种植。在前期研究中,课题组发现水杨酸(SA)在CPPs及党参炔苷的合成代谢中起重要的调控作用。同时筛选获得一株对党参植株生长和代谢产物积累具有显著促进作用的内生真菌菊异茎点霉DS-84。然而其潜在的机制仍然未知。据此,本研究主要探究了水杨酸介导下菊异茎点霉DS-84对党参植株生长及活性成分积累的影响。主要研究结果如下:(1)采用组织表面消毒,纯培养等技术从党参根部筛选获得内生真菌菌株DS-84,形态学、生理生化及分子生物学手段鉴定为菊异茎点霉DS-84(Paraphoma chrysanthemicola strain DS-84),其脂肪酸组分符合深色有隔真菌(Dark septate endophyte,DSE)和菊异茎点霉磷脂脂肪酸(PLFA)的基本组成特征;该菌株最佳碳源、氮源和磷源主要是蔗糖、蛋白胨和磷酸钙,而在液体培养时卵磷脂为最佳磷源;能够分泌淀粉酶、纤维素酶、壳聚糖酶、脂肪酶、碱性蛋白酶和复合酶。在含0.5 mg/m L色氨酸的液体PDA培养基中培养5d时,IAA含量达到28.27 mg/L;在真菌制剂浓度为10~5 cfu/m L时,党参种子萌发率最高为46.0%。(2)应用SMRT测序技术完成了P.chrysanthemicola strain DS-84全基因组测序,并借助各种数据库对基因组做了注释。结果显示:DS-84基因组大小约为46.30 Mb,(G+C)%为50.30%,有16040个蛋白质编码基因,其中10.03%(1609)为分泌蛋白,1862个蛋白存在跨膜区域。在DS-84基因组中预测到2362个碳水化合物活性酶编码基因,37个次级代谢基因簇。(3)P.chrysanthemicola strain DS-84对党参幼苗不致病,能够侵染党参幼苗根部形成深色有隔菌丝和微菌核,进而形成稳定的菌丝-根联系。(4)P.chrysanthemicola strain DS-84处理组显著增加了鲜重、根重及叶片数量,水杨酸处理组显著增加了根直径,且均不同程度地促进党参幼苗根部党参多糖和党参炔苷的积累。P.chrysanthemicola strain DS-84侵染党参幼苗根部和向互作体系外源添加水杨酸,均刺激了植株根、茎、叶各部位信号分子含量发生变化,引发植物体内抗氧化酶、糖代谢相关酶和非酶组分的变化。真菌处理组主要表现幼苗根部过氧化氢含量降低、叶部过氧化氢含量增加、茎部过氧化物酶活性增加、叶部细胞壁酸性转化酶活性增加及根部CPPs和炔苷含量增加;而水杨酸处理组引起茎部过氧化氢含量增加、叶部抗坏血酸过氧化物酶活性增加、植株蔗糖磷酸合成酶活性增加及根、茎部CPPs和炔苷含量增加;真菌和水杨酸联合处理下,使得叶部过氧化氢含量和根部党参炔苷含量较真菌和水杨酸单独处理增长的更多。(5)P.chrysanthemicola strain DS-84和SA可能是通过诱发植株H2O2的信号传导途径,以此促进蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶及转化酶的活性,促进了植株碳代谢,引起非结构性碳水化合物过剩,从而促进多糖和多炔类物质积累。
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