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绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumonia,MO)能感染并危害绵羊,是引起绵羊传染性胸膜肺炎的主要致病菌,而且能感染1-3月龄的羔羊和山羊。MO膜蛋白是MO的主要抗原,在抗原性和致病性方面发挥着重要的作用。
国内外有关MO的分子生物学研究方面,迄今只取得一些有限的进展,在相关疾病的治疗和防治方面尚未取得明显的突破。因此,本研究通过对MO膜蛋白的提取、二维电泳分析和质谱分析,以期获得MO抗原性膜蛋白的部分肽段序列信息,为后续相关基因的获得与新型疫苗的研制等奠定基础。
研究结果如下:
1.利用SDS-PAGE和Western blotting,对4种方法(DCC法、Triton X-100法、Triton X-114法以及Triton X-100和KI的复合法)所提取的MO膜蛋白进行了比较分析。结果显示,不同方法所提取的膜蛋白均具有相同的杂交条带,分子质量大小分别为82.07KDa、68.11KDa、55.30KDa、44.10KDa。
2.应用二维电泳技术,进一步对后3种方法所提MO膜蛋白进行了比较分析。结果显示,Triton X-100和KI的复合提取法较优;MO膜蛋白的分子质量范围在12-128KDa之间,等电点在4.0-7.0之间。
3.采用生物质谱技术,对二维电泳后的杂交阳性点P1(104±2KDa)、P2(82±2KDa)和P3(55±2KDa)进行PMF分析,并且获得了其中两个蛋白质点P1和P3的部分肽段序列,从而为后续相关研究奠定了基础。