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背景和目的原发性肝癌(primary liver cancer, PLC)是世界范围内最常见的10种恶性肿瘤之一,是病死率很高的消化道恶性肿瘤,肝细胞癌(hepatocellular carcinoma HCC)占其中的90%之多。肝癌的治疗手段很多,其中化学药物治疗是失去局部治疗指征的中晚期肝癌的主要治疗手段之一,目前针对肝癌的治疗药物花样繁多,虽然短期内能显示出良好的临床疗效,但肝癌患者的远期生存率并没有得到显著提高,目前尚无明确的证据显示可明显延长肿瘤患者的生存。其中,化疗药物的耐药及其毒副作用为严重限制它们在临床上的应用的原因之一。因此,探索在低剂量的情况下多药的联合应用,是肝癌的药物治疗研究的一个重要方向。全反式维甲酸(ATRA)作为一种现如今公认的分化诱导剂,是维生素A的主要代谢产物,现代资料显示,ATRA可以提高实体瘤对化疗的敏感性,并且能够将一些实体瘤细胞诱导分化成熟。奥沙利铂(L-OHP)与其它铂类药物相类似,是第三代铂类抗癌化合物,L-OHP的作用机制主要是作用于肿瘤细胞内的DNA,使细胞内DNA形成链间和链内的交联,从而中断了肿瘤细胞的DNA合成,最终产生了细胞毒性和抗肿瘤的活性。现有多项研究表明,L-OHP具有抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡作用,并已应用于临床,但还达不到理想效果。将ATRA与L-OHP联用应用于肝癌,是否能够提高疗效?目前尚未见相关报道。本实验从体外细胞学的角度分别观察ATRA、不同浓度的L-OHP对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用,及联合应用是否能增强对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,从而为进一步的研究提供实验依据。材料和方法1。分别观察单独应用ATRA、不同浓度的L-OHP,及二者联合作用于SMMC-7721细胞后,细胞在倒置显微镜下的形态变化;2.应用MTT法分别检测ATRA、不同浓度的L-OHP及二者联合作用于SMMC-7721细胞后24h、48h、72h SMMC-7721细胞的增殖抑制率;3.应用流式细胞仪检测ATRA联合20mg/L L-OHP作用于SMMC-7721细胞48h后细胞周期及凋亡率的变化；结果在倒置显微镜下观察细胞形态可见：对照组肿瘤细胞生长良好,呈梭形及长条不规则形,胞体透亮.当ATRA作用于细胞48h后可见：细胞间隙增宽,可见部分细胞断裂成碎片,呈凋亡改变；联合组作用于细胞48h后可见：大部分细胞断裂成碎片,多数细胞均已漂浮在培养液中,少量细胞仍贴壁生长,并可发现细胞凋亡改变明显,细胞数量明显减少；药物作用细胞72h后可见：凋亡细胞数量继续增多,但较前改变不明显。MTT法的结果显示：ATRA可以抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,当作用于细胞48h后其抑制作用最为明显；不同浓度的L-OHP单药均可显著抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长,并呈剂量-时间依赖性；两药联合较单药相比作用明显增强(P<0.05); ATRA联合40mg/LL-OHP与ATRA联合20mg/LL-OHP相比,在48h及72h时,二者抑制率无统计学差异(P>0.05)。流式细胞结果显示,ATRA作用于SMMC-7721细胞后出现G0/G1期阻滞;L-OHP作用于SMMC-7721细胞后出现S期阻滞；二者联用后S期阻滞明显增强,细胞凋亡比例明显增加(P<0.05)。结论1.ATRA可抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长,作用细胞48h后抑制最为明显；2.10mg/L,20mg/L,40mg/L的L-OHP均可显著抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长,并呈剂量-时间依赖性；3. ATRA联合L-OHP作用于细胞后效果增强,并可减少L-OHP用量,具有协同作用；4. ATRA作用细胞后出现G0/G1期阻滞,L-OHP作用细胞后出现S期阻滞；二者联用后S期阻滞明显增强,细胞凋亡比例明显增加。