基于微孔板的有机磷检测新方法研究

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有机磷毒剂是一类神经性毒剂,可与生物体内的乙酰胆碱酯酶(AChE)结合形成磷酰化AChE,使酶失去活性,导致神经传导功能的严重伤害,甚至死亡。由于此类毒剂具有杀伤力强、难于防护的特点。对有机磷毒剂的检测一直都是环境、军事、和科研部门研究的热点。传统的有机磷残留检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法与色质联用法等。这类方法虽然灵敏准确,但是都需要繁琐的样品预处理,而且需要使用专业技术人员维护的昂贵且庞大的仪器,不适用于现场实时检测。因此,建立实用、快速、可靠、灵敏的有机磷残留监测/检测的分析器件和方法,对于环境保护和食品安全等具有重要的现实意义。阵列生物传感器具有高通量、仪器小型化、便携性等特点,故将其应用于医药学、生物学及环境监测等各个方面的趋势愈加明显。阵列生物传感器将生物传感器微型化,是一门集生化技术、物理学、微电子技术与生命科学等众多学科领域交叉综合的学科。目前,阵列生物传感器已逐渐受到人们的重视,并且已有部分研究成果商品化投入市场。但是,对有机磷阵列生物传感器的研究还处于发展阶段。本论文包括三章。第一章,综述了阵列生物传感器的研究进展和微孔板作为阵列传感器载体的基本性质及用途,描述了本论文的研究目的和研究思路。第二章,以β-葡萄糖苷酶为模型酶研究了酶在表面修饰有氨基的聚苯乙烯微孔板的共价固定方法。研究工作以戊二醛(GA)为活化剂,壳聚糖(Chi)为接枝试剂,牛血清白蛋白(BSA)作为封闭剂,硼氢化钠作为还原剂的方法共价交联固定β-葡萄糖苷酶,建立将β-葡萄糖苷酶共价固定于表面修饰有氨基的微孔板表面的固定化方法。经过优化实验条件,采用2.5%(v/v)的GA、1%(m/v)的Chi、2%(m/v)的BSA、0.1 M硼氢化钠(NaBH4)获得了较好的固定化效果。结果表明:使用接枝试剂将β-葡萄糖苷酶固定于氨基化表面的酶量要比不使用接枝试剂多24倍;固定化β-葡萄糖苷酶有良好的固定化效果及贮存稳定性。为了评估本文中的GA固定化方法的实用性与可靠性,将其与微孔板厂商提供的双琥珀酰亚胺辛二酸酯钠盐(BS3)法进行了比较。对比结果表明,对0.7 U的β-葡萄糖苷酶通过不同方法可得到相同的固定化效果;而β-葡萄糖苷酶为1.1 U时,使用BS3法的固定化酶量略高。然而,BS3试剂昂贵,使用本文中的GA法更为经济。第三章,采用上述经优化的实验条件,通过共价交联法构建了AChE为分子识别物质的阵列生物传感器,建立了快速测定对氧磷残留的传感器方法。结果表明,采用阵列生物传感器检测对氧磷的线性范围为5.0×10-7-5.0×10-5 g·L-1、检出限为2.1×10-7g·L-1。该传感器制作简单,使用方便,高通量等优点。本论文的研究工作为大批量筛查实际样品的有机磷残留建立了基础,进一步的工作为研究其性能及优化对实际样品的检测流程。
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