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目的:Graves病(Graves disease,GD)是一种常见的器官特异性自身免疫性疾病,其特点是在外周血中存在针对甲状腺的自身抗体,同时伴有自体活化的淋巴细胞对于甲状腺的浸润,以及伴有眼眶以及眶周组织的浸润。GD最主要的临床表现包括了甲状腺毒症的高代谢表现、甲状腺弥漫性肿大,血清TSH浓度降低,甲状腺激素(T3、T4)水平的升高等。GD的发病机制到目前并不是特别清楚,但研究表明GD是一种主要由体液免疫参与调节的自身免疫疾病。而2型固有淋巴细胞(ILC2)是由共同淋巴样祖细胞发育而的一种非B、非T细胞的新型淋巴细胞,与免疫关系密切。ILC2受细胞因子IL-25、IL-33和TSLP的刺激后可分泌IL-4、IL-5、IL-9、IL-13和双向调节蛋白等细胞因子。ILC2主要介导Th2类免疫应答,并可以通过多种效应细胞因子调控不同信号通路,在多种免疫性疾病的发生中参与重要的作用,如哮喘、特异性皮炎、嗜酸性胃肠炎等免疫性疾病。而Graves病被认为是Th2免疫反应主导的免疫疾病并且在Graves病患者的甲状腺中浸润的淋巴细胞可以分泌IL-4,IL-5,IL-10,IL-13等细胞因子。本文旨在探讨ILC2是否参与Graves病的发病,于是对ILC2与Graves病之间的联系及其机制进行研究。方法:1.采集Graves病、Graves眼病患者以及健康志愿者外周血,对外周血进行单个核细胞分离,检测外周血单个核细胞中ILC2的比例,并检测外周血浆中IL-4、IL-5、IL-13水平;2.细胞培养分组:对甲状腺上皮细胞进行体外培养,并使用50ng/ml人重组白介素4(rh IL-4)和25ng/ml人重组白介素13(rh IL-13)对甲状腺细胞进行24h体外刺激,并收集细胞上清液,同时提取干预后的甲状腺细胞的RNA;3.检测方法:(1)观察各组对象外周血单个核细胞中ILC2的比例:用流式细胞检测对外周血单个核淋巴细胞中的ILC2比例进行检测;(2)观察ILC2分泌的2类细胞因子的水平:用ELISA(酶联免疫吸附测定)对血浆中的IL-4,IL-5,IL-13水平进行检测;(3)观察rh IL-4和rh IL-13干预后细胞上清液甲状腺激素水平:采用ELISA方法对细胞上清液中T3、T4水平进行检测;(4)观察rh IL-4和rh IL-13干预后甲状腺细胞中PKA、CREB、STAT6、BCl-2基因水平的表达:采用荧光实时定量多聚酶链式反应(q RT-PCR)对PKA、CREB、STAT6、BCl-2 m RNA相对表达量进行检测。4.统计学分析:对数据进行正态性检验,正态分布的计量资料用均数±标准差(xˉ±s)表示,非正态计量资料用中位数和上下四分位数M(P25,P75)表示,应用统计软件SPSS 22.0进行数据分析,对数据进行方差齐性检验,方差齐性的两组计量资料进行独立样本T检验,多组计量资料组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较用LSD-t法;方差不齐的多组计量资料则组间比较采用Kruskal-Wallis H秩和检验,二分类变量采用卡方检验;单因素相关性分析采用Pearson相关系数表示变量与自变量的线性关系,P<0.05认为差异具有统计学意义。结果:(1)与正常对照组相比,GD和GO组患者外周血单个核细胞中ILC2比例显著升高(P<0.05),GO组外周血单个核细胞数较GD组有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);(2)与正常对照组相比,GD和GO组患者外周浆中IL-4、IL-5、IL-13水平显著升高(P<0.05);GO组外周血浆中较GD组外周血浆中IL-4、IL-5、IL-13有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);(3)外周血中ILC2比例与白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数量不存在相关性,而ILC2与甲状腺激素以及甲状腺自身抗体存在相关性,相关性低;ILC2比例和血浆中IL-4、IL-5、IL-13呈正相关(P<0.05)。(4)与正常对照组相比,rh IL-4和rh IL-13干预后细胞上清液甲状腺激素(T3、T4)水平均显著升高(P<0.05)。(5)与正常对照组相比,rh IL-4和rh IL-13干预后甲状腺细胞中PKA、CREB、STAT6、BCl-2 m RNA水平明显升高(P<0.05)。结论:1.Graves病时ILC2可能通过在外周血中比例的增加以及其分泌的2类细胞因子水平的升高,活化Th2免疫反应;2.ILC2分泌的2类细胞因子可能通过抑制甲状腺细胞凋亡、刺激甲状腺细胞激素分泌,导致Graves病的发生发展。