抗生素的发现可以说是现代医学最伟大的成就,它增加了人类的平均寿命。但是滥用和不规范使用抗生素已导致了微生物的耐药性。替加环素是新一代四环素类衍生物,具有超广谱的优点,并能克服传统四环素类药物的耐药机制,但近年来细菌对替加环素产生耐药性的报道越来越多,包括ICU常见的鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌等。大肠埃希菌作为6大致死性微生物之一,已经对多种类的抗生素产生耐药,这引起科学家们的重视。替加环素虽未应用于兽医临床,但对来源于畜禽的大肠埃希菌替加环素耐药情况及其耐药机制进行研究,对了解替加环素与其他抗菌药之间的交叉耐药性,防范重大的人畜共患疾病和指导抗菌药物的临床应用具有重要意义。本课题以在重庆部分区县猪场采集的174株猪源大肠埃希菌为供试菌,研究了其对四环素类药物替加环素、多西环素和土霉素;氨基糖胺类药物庆大霉素;酰胺醇类药物氟苯尼考;喹诺酮类药物恩诺沙星;多肽类药物多粘菌素;碳青霉烯类药物亚胺培南、头孢类药物头孢喹肟等9种药物的耐药水平、多重耐药状况及耐药谱型。并对筛选出的耐替加环素菌株80-1,对替加环素敏感性低于质控菌的菌株22-4以及质控菌分别进行摄入试验,以初探其耐药机制。1耐替加环素临床分离大肠埃希菌的筛选参照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的标准,采用微量肉汤稀释法测定9种药物对174株临床菌株以及质控菌的MIC。结果:174株大肠埃希菌对多西环素耐药水平最高,为91.0%,然后依次为恩诺沙星、土霉素、氟苯尼考、庆大霉素、头孢喹肟、多粘菌素、替加环素和亚胺培南,其占比分别为:83.9%、79.3%、66.7%、64.4%、29.9%、16.1%、0.6%、0.0%;筛选出一株替加环素耐药菌株。9种药物交叉耐药性分析中,多西环素对其他类药物的交叉耐药率最高(A药物对B药物的交叉率(%)=共同耐A、B药物菌株数/耐B药物总菌株数*100%,交叉耐药率越高,说明菌株对B药产生耐药性的同时,对A药产生耐药性的机会越大),最高为替加环素(100.0%),最低是氟苯尼考(88.8%),其中同为四环素类药物土霉素和多西环素表现为双向交叉耐药,不同为同一类药物的土霉素与恩诺沙星,同样表现为双向交叉耐药。头孢喹肟与多粘菌素对其他药物的交叉耐药率较低,头孢喹肟为32.8%,多粘菌素最高值为18.8%;多重耐药情况中,五重占比最高,为37.93%,0重占比最低,为0%。主要集中在4-6重之间,共占比81.61%。结论:在未使用过替加环素的环境中筛选出一株耐药菌80-1;174株临床菌对多西环素、恩诺沙星产生了高水平耐药;交叉耐药以及多重耐药情况较为严重。2替加环素在大肠埃希菌体内累计浓度检测方法的建立与验证方法:根据替加环素性质及参考文献报道,拟定试验方案,筛选样品处理方法后,并根据实际优化色谱条件,通过后期试验确定一种使替加环素出峰效果最佳的色谱条件,并通过分析方法学验证,建立大肠埃希菌体内替加环素的HPLC含量测定方法。结果:色谱条件:流动相为0.1 mol/L磷酸氢二胺-三乙胺-甲醇(70:1:29),紫外检测波长为246nm,流速0.6 mL/min,柱温30℃,进样量10μL。替加环素浓度与峰面积的线性关系良好,线性范围为0.05μg/mL~5μg/mL,回归方程为y=0.3524X+0.004,R2=0.9991,其精密度良好,相对回收率≥94.17%。结论:该检测方法简单快捷、重现性好、结果准确,可用于测定大肠埃希菌体内替加环素含量。3替加环素在大肠埃希菌体内累计浓度的研究方法:利用第4章确定的检测方法,测定耐药菌80-1、敏感菌22-4以及质控菌ATCC25922对替加环素的累计浓度。结果:在替加环素初始浓度相同的情况下,耐药菌80-1稳态累计浓度为0.68 ng/mg,质控菌ATCC25922稳态累计浓度为2.11 ng/mg,质控菌为耐药菌80-1浓度的3.1倍。结论:可推测替加环素对大肠埃希菌耐药机制与累计浓度相关。