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目的:评价雷公藤红素(celastrol,cel)在棕榈酸诱导心肌细胞凋亡中的协同毒性作用及其可能的机制,为雷公藤红素更广泛的应用,降低心脏毒副反应提供理论依据。方法:心肌细胞H9c2生长至汇合度达到约80%时,用不同浓度雷公藤红素(100、200、400、800、1600 nmol/L)处理心肌细胞H9c2,其中Dox作为阳性对照。雷公藤红素联合棕榈酸(PA,0.1 mmol/L)处理心肌细胞H9c2或原代心肌细胞,CCK-8及蛋白印迹法分别检测细胞活力和胞内Cleaved caspase 3,p-AMPKα,AMPKα,p-JNK,JNK,LC3,β-actin的表达水平;采用ROS检测试剂盒和酶标仪检测心肌细胞内ROS水平的变化。结果:1、不同浓度雷公藤红素单独作用H9c2 12h,结果显示雷公藤红素浓度在800 nmol/L及以下时,对心肌细胞活力和激活型caspase3产物没有明显影响(p>0.05),浓度达到1600 nmol/L时,心肌细胞活力下降,胞内激活型caspase3产物增加,对心肌细胞表现出明显毒性作用(p<0.05)。2、不同浓度雷公藤红素与棕榈酸共同处理H9c2 12h,仅200 nmol/L的雷公藤红素就能够明显下调心肌细胞的活力,增加胞内激活型caspase3的积累,并呈现出雷公藤红素剂量依赖性增加。在原代心肌细胞中,雷公藤红素的浓度为200nmol/L及以上时,也同样明显增加胞内激活型caspase3的积累。各组数据p<0.05,差异有统计学意义。3、机制研究发现,雷公藤红素联合棕榈酸可以明显增加H9c2细胞内ROS含量,且是雷公藤红素单独作用时的5倍,是棕榈酸单独作用时的3倍。雷公藤红素促进心肌细胞自噬,联合处理组和棕榈酸单独处理组相比,LC3-II,Cleaved caspase3蛋白表达量显著增加,而自噬抑制剂CQ和3-MA能够显著下调Cleaved caspase3蛋白表达。各组数据p<0.05,差异有统计学意义。另外,联合处理组和棕榈酸单独处理组相比,p-AMPKα,p-JNK显著降低。结论:低剂量雷公藤红素本身不诱导心肌细胞凋亡,但低剂量雷公藤红素与棕榈酸对心肌细胞存在协同毒性作用。其可能的机制是:首先,雷公藤红素与棕榈酸联合作用时导致细胞内ROS大量蓄积,放大棕榈酸诱导的氧化应激损伤;其次,雷公藤红素促进心肌细胞自噬水平增加,从而促进caspase3信号通路介导的心肌细胞凋亡;最后,雷公藤红素抑制JNK和AMPK蛋白的磷酸化水平,从而抑制AMPK/JNK信号的活化,促进棕榈酸介导的心肌细胞凋亡。