目的：布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患传染病。布鲁氏菌可长期寄生于巨噬细胞并抑制感染细胞的凋亡,引起人、畜多器官损伤和慢性感染,给人类健康和畜牧业和谐发展带来严重威胁。布鲁氏菌与巨噬细胞间的胞内寄生关系对布鲁氏菌慢性感染至关重要,病原学研究发现,布鲁氏菌外膜蛋白和Ⅳ型分泌系统家族蛋白与布鲁氏菌的侵染、胞内生存、繁殖有直接关系,是公认的毒力因子。探讨与布鲁氏菌毒力因子相互作用的巨噬细胞靶蛋白功能成为了研究布鲁氏菌的胞内寄生机制的分子基础,为探索布鲁氏菌病药物作用的候选靶点奠定理论基础。方法：(1)应用免疫共沉淀技术验证与布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB5相互作用的靶蛋白FTH1。(2)应用分子克隆技术将FTH1、16S rRNA、GAPDH和凋亡相关基因的实时定量目的基因片段进行克隆、测序,并制作定量标准曲线。(3)运用TurboFectTM in vitro Transfection Reagent将针对FTH1基因的3个阳性和1个阴性pSIREN-siRNA质粒分别转染RAW264.7巨噬细胞,通过荧光实时定量PCR技术检测FTH1 mRNA表达量的变化,筛选出干扰效果最好的pSIREN-siRNA质粒。(4)将最优pSIREN-siRNA质粒转染RAW264.7巨噬细胞,48h后用绵羊种布鲁氏菌019株侵染4h,通过荧光实时定量PCR技术检测16S rRNA和凋亡相关基因mRNA表达量的变化。(5)扫描电镜观察RNA干扰前后侵染布鲁氏菌的RAW264.7巨噬细胞形态变化。(6)收集用绵羊种布鲁氏菌019株分别侵染15min、30min、1h、4h,并转染了最优pSIREN-siRNA质粒的RAW264.7巨噬细胞培养液上清进行ELISA检测。结果：(1)VirB5蛋白与靶蛋白FTH1相互作用。(2)克隆出FTH1、16S rRNA、GAPDH和凋亡相关基因的实时定量目的基因片段,制作出11条荧光实时定量标准曲线。(3)荧光共聚焦显微镜检测用TurboFectTM in vitro Transfection Reagent转染RAW264.7巨噬细胞的效率接近于100%,从3个阳性pSIREN-siRNA质粒中筛选出干扰效果最好的质粒为pSIREN-C质粒,对FTH1的干扰效率为98%。(4)荧光实时定量检测被绵羊种布鲁氏菌019株侵染并含有pSIREN-C质粒的RAW264.7巨噬细胞中,对16S rRNA的抑制率为84%,两个凋亡抑制基因Mkll和Birclb的抑制率分别为76.3%和88.8%。(5)电镜观察布鲁氏菌侵染干扰后的RAW264.7巨噬细胞,核仁皱缩,接近消失,出现凋亡症状。(6)ELISA检测结果显示：在绵羊种布鲁氏菌019株侵染RAW264.7巨噬细胞的不同阶段,IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α分泌量呈不同程度的上升。结论：(1)VirB5蛋白与靶蛋白FTH1相互作用。(2)转染了pSIREN-C质粒的RAW264.7巨噬细胞对绵羊种布鲁氏菌019株的侵染有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用。(3)IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α等细胞因子分泌量的变化不利于绵羊种布鲁氏菌019株在RAW264.7巨噬细胞的生存和繁殖。