已知帕金森病(Parkinson‘s disease,PD)的主要病理是中脑黑质多巴胺能神经元的特异性与持续性死亡,而引起这一死亡的病因机制至今不清楚。众多研究者推测,这一死亡和多巴胺(dopamine,DA)的代谢有密切关系。正常情况下,多巴胺能神经元通过末梢将释放的递质DA重吸收入细胞,与胞内合成的DA一起,由囊泡转运体转运至囊泡中储存,从而避免DA被氧化。当某些原因导致细胞内游离DA上升时,游离DA极易受氧化应激而形成多巴胺醌(dopamine quinone,DAQ),DAQ可与含巯基的蛋白结合形成醌蛋白而导致细胞毒性,引起多巴胺能神经元的特异性死亡。为验证DA的醌毒性作用和抗醌氧化的细胞保护作用,本论文运用人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)作为多巴胺能细胞模型,研究增加外源游离DA对细胞内醌蛋白的累积效应以及对细胞生存率的影响。在此基础上,探讨DA细胞毒性的可能途径。已知萝卜硫素(sulforaphane,SF)可以诱导醌氧化还原酶(NQO1)的表达,而NQO1具有降低细胞内醌化物的作用,因而论文探讨了SF对DA毒性的预防作用。实验主要分为两部分:首先,我们通过增加外源性DA,不同浓度作用于SH-SY5Y细胞,24 h后以MTT法检测细胞存活率、NBT法检测醌化蛋白含量、Western Blotting法检测帕金森病相关蛋白含量;实验结果显示,在一定DA浓度范围内,DA对SH-SY5Y细胞具有剂量依赖性的毒性作用并与醌化蛋白含量具有正相关性;80μM DA作用后,PINK1、Parkin和DJ-1等帕金森病相关蛋白含量显著下降。其次,我们通过SF 1.25μM预处理12 h,在诱导醌氧化还原酶NQO1高表达的基础上,加入DA,检测细胞醌化蛋白含量和细胞存活率;实验结果显示,SF预处理后DA引起细胞内醌化蛋白量上升的现象明显被抑制,细胞存活率上升,进一步证明DA毒性与醌化蛋白的形成具有相关性,SF对DA毒性起到一定的保护作用。综上,DA的细胞毒性作用可能与其氧化产物多巴胺醌以及进一步形成的多巴胺醌-蛋白有关,已知帕金森病相关蛋白PINK1,Parkin,DJ-1与线粒体、泛素系统的功能密切相关,该类蛋白因富含巯基,易被醌化形成多巴胺醌-蛋白多聚物,因而使实验中未醌化的正常蛋白含量明显下降而影响功能,这可能是DA引起细胞死亡的重要途径之一。