微生物絮凝剂ZS-7的制备、纯化及应用研究

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相对于传统化学合成絮凝剂而言,微生物絮凝剂是一种安全、无毒、易生物降解、不产生二次污染的絮凝剂,近年来,已经引起了科学界的广泛关注。作为一种化学合成絮凝剂的替代产品,微生物絮凝剂在广泛的工业领域如废水处理,饮用水处理,食品和发酵行业,重金属和染料的去除方面等等有着很好的应用潜力。然而,低絮凝能力和高成本已经成为微生物絮凝剂发展过程中的主要问题。因此,筛选高效絮凝剂产生菌和降低絮凝剂生产成本为当前的主要目标。 本文对由地衣芽胞杆菌产生的微生物絮凝剂ZS—7的的纯化、性质、絮凝性能、絮凝机理以及实际应用等方面进行了重点研究,其主要工作如下: (1)本文从6个不同的样品中筛选分离得到32株具有絮凝活性的菌株,其中来自中山大学校园土壤,编号为X14的一株细菌展示了最高的絮凝活性(超过98%)且絮凝时间较其它菌株要短。经生理生化实验鉴定及16S rDNA序列分析,X14被鉴定为地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)。 (2)通过对地衣芽孢杆菌的培养条件优化,获得其最佳的培养条件为:淀粉10 g/L,氯化铵0.51 g/L,3g/L K2HPO4和1 g/L KH2PO4,初始pH值为8.0,接种量采用1%,摇床转速采用140~160 r/min的变速控制,37℃培养48 h。絮凝因素实验表明,微生物絮凝剂ZS—7在广泛的pH(2~12)和温度(4~95℃)范围内均具有极好的絮凝活性,二价和三价阳离子对絮凝具有促进作用,热稳定实验表明ZS—7具有良好的热稳定性。 (3)通过透析,乙醇沉淀,CPC反应,Sephacryl S—500凝胶过滤层析对微生物絮凝剂进行了纯化,并对纯化后的ZS—7进行了定量和系列结构特征分析。结果表明:纯化后的微生物絮凝剂ZS—7为糖蛋白。其主要由多糖和蛋白质构成,含量分别为91.5%和8.4%。进一步的分析说明ZS—7中含有酸性多糖包括糖醛酸(16.4%),丙酮酸(7.1%)和乙酸(0.5%)。同时ZS—7中还含有3.2%的氨基糖。产量分析显示1升的发酵液中能收获约0.98 g的纯糖蛋白ZS—7。采用凝胶色谱法测得ZS—7的分子量为6.89×104 Da。红外光谱,X射线能谱图和核磁共振图谱说明糖蛋白絮凝剂ZS—7含有羟基,氨基,羧基,甲氧基,磺酸等功能性基团。单糖组成分析说明ZS—7主要由鼠李糖,甘露糖,葡萄糖和半乳糖组成,各单糖的摩尔比大致为:半乳糖:葡萄糖:甘露糖:鼠李糖=142:2.2:4.5:3.4。毒理实验结果显示微生物絮凝剂ZS—7是一种安全无毒的微生物发酵制品。 (4)为降低微生物絮凝剂的生成成本,采用高浓度的有机废水(淀粉废水、牛奶废水、啤酒废水和食品废水)作为替代培养基,对地衣芽胞杆菌X14进行培养,以获得价廉、高效的微生物絮凝剂。实验结果表明:以淀粉废水为替代培养基时得到的絮凝剂絮凝活性最强。优化后淀粉废水培养基组成为:原水经预处理后稀释4倍(CODcr浓度为8462~8796 mg/L),外加3g/L的K2HPO4。培养条件如下:培养温度采用37℃,初始pH为8.0,摇床转速140~160 r/min,接种量采用3%,培养72 h后收集其絮凝活性最高可达96.5%。 (5)对微生物絮凝剂ZS—7的絮凝机理进行了初步研究,提出其凝聚絮凝高岭土主要作用机理是以“静电中和”和“吸附架桥”作用为主,Ca2+则主要起压缩双电层,静电中和作用。含量适宜、分布均匀的羟基、氨基、酰胺基、羧基和甲氧基使絮凝剂分子能够充分伸展,有效发挥吸附架桥作用。 (6)微生物絮凝剂ZS—7的实际应用研究结果表明: ①在印染废水的处理方面,微生物絮凝剂ZS—7,PAC和PAM对两种分散染料HW—BG和S—5BL的脱色效果都非常好,相比较而言,达到最高的脱色率时,PAC用量最多(100 mL),ZS—7次之(20 mL),PAM最少(10 mL)。因此可以说在对分散染料废水的处理上,微生物絮凝剂明显优于PAC而弱差于PAM。类似的结果也出现在对活性染料Red HE3B和Yellow3RS的处理上。而在对碱性染料Yellow X—GL的处理上,三种絮凝剂均没有脱色效果。 ②在低温低浊度饮用水的处理方面,水温对PAC和PAM的影响比较大,而对微生物絮凝剂ZS—7基本上没有影响,ZS—7在处理室温和低温饮用水时在基本上获得了相同的实验结果。在沉淀5 min后,用ZS—7处理后的低温饮用水的浊度和CODMn分别为1.6 NTU(去除率为95.6%)和3.8 mg/L(去除率为61.2%)。去除率优于传统絮凝剂如PAC和PAM。 ③在污泥的处理方面,微生物絮凝剂ZS—7(2 mL)+CaCl2(3 mL)在对污泥沉降性能及过滤性能方面的改善方面均优于传统的絮凝剂PAC(5 mL)和PAM(5mL)。
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