【摘 要】
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SQUAMOSA PROMOTER BINDING PROTEIN-LIKE(SPL)基因 是植物所特有的转录因子,研究发现它能够参与到植物生物及非生物胁迫的应答过程中。目前这一研究也只是集中于草本植物中,
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SQUAMOSA PROMOTER BINDING PROTEIN-LIKE(SPL)基因 是植物所特有的转录因子,研究发现它能够参与到植物生物及非生物胁迫的应答过程中。目前这一研究也只是集中于草本植物中,对于木本植物中SPL基因的研究较少,本研究通过构建白桦BpSPL9基因的植物过表达载体,进行白桦的遗传转化,对获得的转基因株系进行盐旱胁迫,验证白桦BpSPL9基因所发挥的作用。主要研究包括:1.在白桦45个转录组数据库中获得了 12条白桦BpSPL基因,对12条白桦BpSPL基因进行生物信息学分析发现,这些白桦BpSPL基因特性差异较大,由不等数目的内含子与外显子串联在一起,分布在8对染色体上,具有典型的SBP结构域,其中7条白桦BpSPL基因具有miR156的识别位点。2.通过实时荧光定量PCR的方法,对12条白桦BpSPL基因在白桦不同组织部分的表达模式进行分析,结果表明:这些基因在白桦叶、芽、茎、雄花和雌花中均有表达,但同一组织部位不同基因的表达模式不同,同源性高的基因具有相似的表达模式;在芽、茎和雄花中miR156与其受到调控的白桦BpSPL基因间存在着一定的相互作用;NaCl和PEG胁迫处理白桦实生苗后,根和嫩叶中BpSPL9基因的表达存在一定的变化,该基因参与到了相关的胁迫响应过程中。3.应用Gateway技术构建白桦BpSPL9基因的植物过表达载体,采用根瘤农杆菌介导的叶盘法进行白桦的遗传转化,通过PCR、Q-PCR和Northern杂交对转基因植株进行鉴定,发现白桦BpSPL9基因已经成功整合到了植物基因组内并稳定表达,且转基因植株的BpSPL9基因表达水平远高于非转基因对照植株。4.选取1.0%NaCl和15%PEG对转基因白桦和非转基因对照株系进行胁迫处理,处理后的叶片进行DBA和NBT染色分析,测定不同胁迫处理条件下SOD活性、POD活性和H2O2含量的变化,结果表明,与非转基因对照株系相比,转基因株系在逆境胁迫条件下,表现出更高的抗逆能力。
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