论文部分内容阅读
目的:从蛋白和分子水平检测子宫内膜异位症(简称内异症,EMs)组织中缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平及其过度表达与EMs血管生成机制之间的关系。进一步了解HIF-1α在EMs发生、发展过程中所发挥的作用,为指导临床诊断和治疗提供理论依据。方法:⑴研究对象:选自2006年6月—2007年10月间我院手术治疗并经病理证实的EMs异位内膜组织(ectopic endometrium,简称EC)、在位内膜组织(eutopic endometrium,简称EU)和正常的子宫内膜组织(normal endometrium,简称NE)标本共75例,其中①研究组:异位内膜组织、在位内膜组织各30例,患者中位数年龄32.6岁(21～38岁)。②对照组:正常的子宫内膜15例,取自同期因非EMs不孕行腹腔镜检查同时刮宫送病理的患者(刮取的子宫内膜均由病理证实为正常的子宫内膜),患者中位数年龄32.4岁(26～35岁)。各组患者年龄无差异,所有病例均经组织学证实,月经周期正常,且无内分泌、免疫及代谢系统疾病,术前6个月无甾体类激素治疗史,近来6个月无内异症治疗史及IUD置入史。所取标本一部分经10%固定,用于免疫组化定性分析,一部分迅速放入液氮中,用于RT-PCR定量分析。所有数据均用SPSS13.0统计软件进行分析。⑵实验方法:采用免疫组化的方法对实验组的在位内膜、异位内膜和对照组中的HIF-1α、VEGF蛋白表达进行测定。采用RT-PCR的方法对实验组的在位内膜、异位内膜和对照组中的HIF-1α、VEGFmRNA表达进行测定。结果:(1) HIF-1α、VEGF蛋白的阳性分布HIF-1α阳性表达主要见于异位内膜(Fig.1)、在位内膜(Fig.2)腺上皮细胞胞浆内,个别异位内膜间质亦可有表达。正常子宫内膜组织(Fig.3)中HIF-1α蛋白无表达;VEGF阳性表达主要见于异位内膜(Fig.4)、在位内膜(Fig.5)、正常内膜(Fig.6)的腺上皮细胞,在间质细胞和血管内皮细胞胞浆也可见。(2) HIF-1α、VEGF蛋白在异位内膜、在位内膜和正常内膜组织中的表达: HIF-1α蛋白在异位内膜、在位内膜、正常内膜的阳性表达率分别为86.6%、30.0%、0%(Tab.1);VEGF在在异位内膜、在位内膜、正常内膜的阳性表达率分别为66.6 %、90.0%、20.0%(Tab.2)。HIF-1α蛋白在异位内膜、在位内膜中的表达显著高于正常内膜(χ2=34.73,P<0.05;χ2=7.32,P<0.05);HIF-1α蛋白在异位内膜的表达高于在位内膜(χ2=19.82,P<0.05);HIF-1α蛋白在EMs中在位内膜和正常内膜的月经周期中表达均无显著性差异(P>0.05);VEGF蛋白在异位内膜、在位内膜中的表达显著高于正常内膜(χ2=6.89,P<0.05:χ2=24.96,P<0.05);VEGF蛋白在位内膜的表达高于异位内膜(χ2=4.81,P<0.05)。VEGF蛋白在EMs中在位内膜月经周期中表达无显著性差异(P>0.05)。EMs异位内膜、在位内膜中HIF-1α蛋白与VEGF蛋白的表达存在相关性,相关系数分别为(r=0.73,P<0.05;r=0.68,P<0.05)(Tab.6,Tab.7)。(3) HIF-1α、VEGFmRNA在EMs的表达HIF-1αmRNA扩增基因片段:469bp(Fig.7),VEGFmRNA扩增基因片段:245bp(Fig.8),β-action mRNA扩增基因片段:205bp(Fig.9)。EMs异位内膜、在位内膜中HIF-1αmRNA表达量分别为(0.789±0.326)、(0.295±0.154),显著高于正常内膜HIF-1αmRNA的表达量(0.124±0.012)(t=33.51,P<0.05);而异位内膜HIF-1αmRNA表达量又显著高于在位内膜(t=26.30,P<0.05)(Tab.3)。EMs异位内膜、在位内膜中VEGF mRNA表达量分别为( 8.160±5.342 )、(11.521±7.420),显著高于正常内膜VEGFmRNA的表达量(2.770±1.028)(t=43.98,P<0.05);而VEGFmRNA在异位内膜和在位内膜表达无显著性差异(t=3.09,P>0.05)(Tab.4);VEGF mRNA和HIF-1αmRNA表达相对量的相关性分析表明:EMs中异位内膜组VEGF mRNA和HIF-1αmRNA表达相对量有密切相关性(r=0.83 , P<0.05),在位内膜VEGF mRNA和HIF-1αmRNA表达相对量有密切相关性(r=0.72 , P<0.05 )结论:(1) HIF-1α蛋白、mRNA在EMs的异位内膜、在位内膜中的表达水平均显著高于正常内膜,HIF-1α在EMs异位内膜的表达显著高于EMs的在位内膜。(2) VEGF蛋白、mRNA在EMs的异位内膜、在位内膜中的表达水平均显著高于正常内膜,VEGF蛋白在EMs在位内膜的表达显著高于EMs的异位内膜,而VEGF mRNA在EMs在位内膜的表达与异位内膜无显著性差异。HIF-1α蛋白在正常子宫内膜和EMs中都无周期性表达,VEGF蛋白在正常子宫内膜有周期性表达,而在EMs中在位内膜周期性表达消失。(3) EMs组织中HIF-1α和VEGF表达呈正相关,说明HIF-1α在EMs中可能促进了VEGF的表达。(4)统计分析表明HIF-1α、VEGF在EMs中的表达水平比正常内膜增高,表明两者与EMs的发生、发展密切相关。