第一部分奥美拉唑胶囊人体生物等效性及药代动力学研究 第一节血浆奥美拉唑浓度测定方法的建立 本实验旨在建立测定人血浆奥美拉唑浓度的反相高效液相色谱法。采用二氯甲烷萃取血浆样品：样本血浆加入磷酸缓冲液(pH10.0)及二氯甲烷，混匀，萃取后取下层有机相，浓缩复溶后进样分析。色谱柱为SymmetryShieldC18柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为0.02mol/L磷酸二氢钾(pH7.2)-乙腈(73∶27)，流速1.00mL/min，检测波长302nm。内标法峰面积比定量。在此条件下，奥美拉唑血浆浓度在6.65～1330μg·L-1呈良好的线性关系，低、中、高三种浓度的绝对回收率分别为73.33％、75.16％和70.77％，相对回收率分别为101.66％、106.89％、101.67％，日内、日间相对标准差(RSD)均小于15％。最低检测限为6.65μg·L-1。该法简便、准确，适用于奥美拉唑人体内的药代动力学研究。 第二节奥美拉唑胶囊的相对生物利用度及生物等效性研究 采用两制剂双周期交叉设计进行试验。22名男性健康志愿者随机分成两组，分别单剂量口服奥美拉唑胶囊40mg，一组受试者先服用试验药品，后服用对照药品；另一组受试者先服用对照药品，后服用试验药品。试验分成两周期进行，两周期间间隔1周。采用反相高效液相色谱法测定血药浓度，用DAS2.0计算各受试者的有关药代动力学参数及相对生物利用度F值，采用方差分析、双单侧t检验及(1-2α)可信区间分别对试验药品和对照药品的AUC和Cmax等参数进行统计分析，用非参数检验对Tmax进行统计分析，然后作出生物等效性评价。 第三节奥美拉唑胶囊的人体药代动力学研究 从奥美拉唑胶囊人体生物等效性试验中我们发现，有两名健康志愿者的药时曲线下面积比同组其他健康志愿者的药时曲线下面积平均值高出2～5倍，导致AUC值个体差异大，AUC标准差达均值80％以上，方差分析表明个体间的差异显著。我们在AUC的均值±SD的范围内用单纯随机抽样法筛选出7名健康志愿者，用DAS2.0药代动力学批处理程序计算这7名男性健康志愿者口服奥美拉唑胶囊40mg的药代动力学参数，与前2名健康志愿者比较。结果表明这7名受试者单次口服奥美拉唑胶囊40mg的主要药代动力学参数为：AUC0→121530.2±1035.7μg·h·L-1，AUC0→∞1562.6±1048.9μg·h·L-1，T1/21.05±0.28h，CL/F0.64±0.41L·h-1·kg-1；而这2名受试者单次口服奥美拉唑胶囊40mg的主要药代动力学参数分别为：AUC0→128897.8±4485.2μg·h·L-1，AUC0→∞9850.6±4938.5μg·h·L-1，T1/22.03±0.01h，CL/F0.23±0.11L·h-1·kg-1。两名受试者的AUC0→12、AUC0→∞，均显著高于另7名受试者的均值约2～5倍，T1/2延长，清除率CL/F降低。奥美拉唑在这两名受试者的体内过程与其他受试者存在显著差异。 第二部分奥美拉唑的主要代谢酶CYP2C19基因型的检测 采用PCR结合限制性内切酶技术进行CYP2C19基因型检测。抽取外周静脉血2ml,采用全血DNA提取试剂盒提取基因组DNA。鉴定ml型突变基因时，根据CYP2C19等位基因的第4个内含子和第5个外显子连接处两侧的碱基序列合成其特异性PCR引物，用限制性内切酶SmaI消化其PCR产物，然后进行凝胶电泳分析。检测m2型突变基因则根据CYP2C19等位基因的第4个外显子两端的内含子碱基序列合成其特异性的PCR引物，PCR产物在限制性内切酶BamHI消化后进行凝胶电泳分析。结果表明：奥美拉唑PK研究中，药时曲线下面积异常大的这2名受试者为慢代谢型，而另7名受试者为快代谢型。