【摘 要】
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目的:通过比较不同细胞类型胰岛组织特异性基因DNA甲基化程度差异及与基因表达的关系,探讨DNA甲基化在胰岛组织特异性基因表达和胰岛分化中的作用。方法:采用甲基化DNA免疫共
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目的:通过比较不同细胞类型胰岛组织特异性基因DNA甲基化程度差异及与基因表达的关系,探讨DNA甲基化在胰岛组织特异性基因表达和胰岛分化中的作用。方法:采用甲基化DNA免疫共沉淀—实时定量PCR法(MeDIP—qPCR)比较小鼠胰岛素瘤β细胞(NIT1)、NIH小鼠成纤维细胞(NIH3T3)及小鼠胚胎干细胞(mES)三者Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1和Insulin等基因转录起始区DNA甲基化程度差异。同时采用实时定量RT-PCR检测上述三种细胞各基因mRNA表达水平。比较这些基因DNA甲基化水平与基因表达之间的相互关系。结果:NIH3T3细胞Pdx-1、MafA和Nkx6.1基因转录起始区呈高甲基化,在NIT1细胞和mES细胞中这些基因则呈低甲基化,前者的甲基化程度明显高于后两者(P＜0.05)。另外两种基因Pax4和Insulin转录起始区在三种细胞中呈低甲基化,NIH3T3细胞Pax4基因的甲基化程度与NIT1细胞无统计学差异(P＞0.05);前者Insulin基因呈非甲基化,其甲基化程度低于后者(P＜0.05)。在基因表达方面,NIT1细胞高表达Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1和Insulin等基因,NIH3T3和mES细胞则未见这些基因表达。结果显示高甲基化状态的NIH3T3细胞无Pdx-1、MafA和Nkx6.1表达,而呈低甲基化状态的NIT1细胞则高表达Pdx-1、MafA和Nkx6.1。Pax4和Insulin基因甲基化状态与基因表达之间则无相关性。在胚胎干细胞中各基因呈低甲基化状态,也未见基因表达。结论:DNA甲基化参与了胰岛组织特异性基因的表达调控,且在胚胎干细胞向胰岛分化的过程中起重要调节作用。
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