根据本实验室前期工作中获得的东北林蛙皮肤抗菌肽Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ序列,优化后利用真核表达体系毕赤酵母进行对目的抗菌肽进行诱导、表达及纯化。对表达后的重组抗菌肽进行抑菌实验,评价其抗菌活性以及协同作用。本实验将Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ进行全基因合成后,对其进行双酶切,获得目的基因,将目的基因连接到Ppic9K质粒上,获得pPic9K-Dybowskin-YJ及pPic9K-Ranatuerin-2YJ 重组质粒。将重组质粒 pPic9K-Dybowskin-YJ 及 Ppic9K-Ranatuerin-2YJ电转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中,通过平板培养以及PCR筛选出阳性且高表达的重组菌株。利用甲醇对重组的菌株进行诱导,对表达的上清液进行Tricine-SDS-PAGE电泳检测,检测目的蛋白是否表达。再利用Ni-Agarose分离及纯化目的抗菌肽,利用Tricine-SDS-PAGE电泳检测观察其纯化效果。重组Dybowskin-YJ和重组Ranatuerin-2YJ对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的MIC皆为50ug/mL。重组抗菌肽Dybowskin-YJ和Ranatuerin-2YJ在抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌时均具有协同作用。本实验建立了抗菌肽Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ的毕赤酵母表达系统,诱导表达纯化了重组抗菌肽Dybowskin-YJ及Ranatuerin-2YJ,且对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌活性具有明显的抑菌活性。为重组抗菌肽Dybowskin-YJ和Ranatuerin-2YJ的实际应用提供数据基础。