附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的侧根加工品。均系栽培。主产于四川、陕西等地。附子辛、甘,大热;有毒。归心、肾、脾经。具有回阳救逆,补火助阳,逐风寒湿邪的功能。生品有大毒,多炮制加工降毒后入药。本课题为国家十五攻关课题“含乌头碱中药附子理中丸安全性评价的示范研究”——附子炮制减毒存效研究的一部分。附子理中丸中使用的附子为制附子,粉末入药,主要药效和毒性成分为乌头碱类生物碱。此次研究以四川江油鲜切生附子片为研究对象,系统研究加压蒸制工艺对附子中所含乌头碱类生物碱成分的影响,结合毒性和药效试验结果,从中寻找低毒高效的制附子炮制程度;进一步优化附子炮制工艺,研究该工艺的适用性,探讨附子饮片的炮制程度评价方法,为制定附子饮片减毒增(存)效的多指标综合评价体系和揭示炮制对附子减毒存效(增效)的机理提供依据;研究附子饮片应用的适用性,为指导临床用药提供参考依据。研究内容及结果如下:(1)通过古今文献研究,对附子的历史沿革、化学、药理、毒理、炮制及临床应用等相关领域进行了综述,为制定切实可行的实验方案提供依据。(2)对已经发现的蒸制时间影响制附子中乌头碱类生物碱含量的变化规律进行进一步研究,探讨影响加压蒸制附子质量的因素,研究该变化规律的适用性。通过实验,我们认为蒸制时间对制附子中乌头碱类生物碱的变化规律基本可以重现,对附子炮制工艺的筛选具有一定的指导意义。影响加压蒸制附子中乌头碱类生物碱含量的主要因素是蒸制时间,饮片含水量、投料量等对制附子中乌头碱类生物碱含量也有一定影响。(3)确定附子饮片中单酯型生物碱与双酯型生物碱峰面积总和的比值可作为评价附子炮制程度的指标,建立了描述比值与蒸制时间关系的多元方程。通过此方程,可以在投料量固定的情况下,计算任意比值下所需要的蒸制时间,或者推算任意时间下的单双酯型生物碱比值,也可根据已知的比值判断炮制程度。(4)通过分析双酯型生物碱、单酯型生物碱成分的变化趋势,结合药效、毒理实验,筛选出了低毒高效的附子饮片,找出其对应的加热时间,并对炮制工艺技术参数进行优化。在此基础上,按确定的炮制工艺,制备相同产地不同批次、不同产地和不同规格的制附子,结合指纹图谱和双酯型生物碱的含量进行工艺评价研究,探讨该工艺的适用性,结果表明该工艺适用性较好,所建立的评价工艺优劣的方法可行。(5)通过比较加压蒸制附子和其他市售制附子的水煎液中成分的溶出变化情况,研究附子饮片应用的适用性。研究证实,生附子先煎具有促进毒性成分双酯型生物碱水解的作用,可进一步降低毒性,但不能代替炮制;采用自制工艺制备的加压蒸制附子水煎液中成分的溶出变化与市售制附子有很大区别;我们所筛选出的加压蒸制工艺制备的制附子,可直接作为粉末入药在成药如附子理中丸中使用,但若入煎剂则不需先煎。根据研究结果,我们认为,附子的动态炮制工艺研究具有一定的可行性,通过采用计算机模拟工艺条件和数学建模的方法,进一步完善动态方程,可以实现附子动态炮制,即采用任意来源生附子,通过测定生品酯型生物碱含量和进行数据分析,就可推测和计算达到炮制适中的蒸制时间,确定制备高效低毒制附子的工艺参数。另外,通过对加压蒸制附子和其他市售制附子的水煎液中成分的溶出变化情况进行比较,我们认为汤剂所用的制附子其工艺应有别于粉末入药制附子,两者应为针对不同临床用途采用不同的炮制时间制备的不同饮片规格。作为汤剂使用的制附子炮制时间应比粉末入药的制附子炮制时间适当缩短,才能达到低毒高效的要求。本课题研究成果,对于阐明附子炮制减毒存效的科学内涵、实现附子炮制生产的规范化、饮片质量的标准化起到了重要的促进作用,有效地提高附子药材的的社会效益和经济效益,并对毒性中药安全性评价的研究起到良好的示范作用,具有重要的现实意义。