【摘 要】
：
由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis)引起的结核病(Tuberculosis,TB)是全球主要的健康问题之一。卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)是目前临床上唯一批准使用的预防性结核疫苗,可预防严重的儿童结核病,但其对成人结核病的保护作用不佳。由于卡介苗提供的保护有限,所以我们急需开发一种能够预防儿童和成人
论文部分内容阅读
由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis）引起的结核病（Tuberculosis,TB）是全球主要的健康问题之一。卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）是目前临床上唯一批准使用的预防性结核疫苗,可预防严重的儿童结核病,但其对成人结核病的保护作用不佳。由于卡介苗提供的保护有限,所以我们急需开发一种能够预防儿童和成人结核病的新型疫苗。在新型疫苗中,病毒样颗粒（Virus-like particles,VLPs）作为一种特殊类型的亚单位疫苗,在多种病毒疫苗中研制成功并为人类提供了有效的保护。特别是近年来以病毒样颗粒为载体平台,融合外源表位的嵌合病毒样颗粒广泛应用于疫苗研发。目的:将结核分枝杆菌细胞壁抗原HBHA和菌毛抗原MTP细胞外肽片段构建的融合蛋白HBHA109-170-MTP27-89（HM）展示于流感病毒样颗粒表面,构建基于流感病毒样颗粒为载体的结核亚单位疫苗LV20,并以小鼠为模型,评价疫苗的免疫原性。方法:1.构建昆虫杆状病毒表达载体系统（Insect baculovirus expression vector system,IBEVS）的穿梭载体Bacmid-HM-MS。选择带有双启动子的p Fast Bac Dual质粒,在PPH和Pp10启动子后分别连接流感基质蛋白M1 DNA序列和HA的部分（跨膜区和胞外信号肽区）DNA序列,得到p Fast Bac Dual-MS质粒;设计引物,通过基因工程将HM DNA序列连接在p Fast Bac Dual-MS质粒上,通过PCR和测序验证重组质粒p Fast Bac Dual-HM-MS;p Fast Bac Dual-HM-MS转化至DH10BacTM感受态细胞,通过转座酶作用后,再经过蓝白斑筛选和PCR分析,验证重组杆粒Bacmid-HM-MS。2.嵌合病毒样颗粒LV20的表达、纯化和鉴定。提取Bacmid-HM-MS,转染Expi Sf9?昆虫细胞得到P0代杆状病毒,后续扩大感染得到P1代杆状病毒。病毒感染Expi Sf9?细胞后在增强剂作用下大量表达嵌合病毒样颗粒LV20;利用超速离心收集并通过蔗糖密度梯度离心纯化LV20;纯化后的嵌合病毒样颗粒通过Western blot和电子显微镜验证病毒样颗粒的表达和组装情况。3.嵌合病毒样颗粒LV20的免疫原性检测。在第0、2、4周分别用PBS、BCG、LV20、LV20联合DDA-Poly I:C佐剂（DP）、HBHA联合DP佐剂免疫小鼠三次。末次免疫6周后,通过流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞分泌抗原特异性的IL-2和IFN-γ的水平,再应用ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体（Ig G、Ig G1、Ig G2c）分泌的程度。结果:1.流感载体质粒p Fast Bac Dual-MS经华大基因公司合成后并测序验证;再通过基因工程,成功将HM DNA序列克隆至p Fast Bac Dual-MS质粒,经PCR验证和DNA测序验证,构建获得p Fast Bac Dual-HM-MS质粒;p Fast Bac Dual-HM-MS质粒转座后,经筛选和PCR验证获得阳性转座菌落,提取杆粒获得Bacmid-HM-MS。2.在昆虫细胞中表达了嵌合病毒样颗粒,经Western blot验证,流感基质蛋白M1和结核蛋白HM成功表达,并通过电子显微镜观察到了80-100纳米的颗粒,成功制备了基于流感病毒样颗粒的结核亚单位疫苗LV20。利用蔗糖密度梯度离心法对其进行了纯化。3.LV20结合DP佐剂和单独LV20免疫过的小鼠脾脏淋巴细胞,与BCG和HBHA联合DP佐剂组相比,在结核分枝杆菌抗原刺激后产生的IFN-γ和IL-2较高;LV20联合DP佐剂组免疫过的小鼠,血清中产生的结核抗原特异性抗体Ig G、Ig G1和Ig G2c高于BCG组。结论:我们成功地以流感病毒样颗粒为载体构建了一种表面展示结核抗原(HBHA109-170-MTP26-89)的嵌合病毒样颗粒LV20,该嵌合病毒样颗粒免疫小鼠后可有效地诱导抗原特异性细胞免疫和体液免疫,有望成为一种新的结核病候选疫苗。
其他文献
随着网络规模的复杂化和结构的多样化,多层网络模型逐渐被用于分析更加复杂的社会现象。其中多层相依网络中的传播动力学问题逐渐进入研究者的视野,成为该领域新兴的研究热点。多层复杂网络中的疾病传播往往是借助于媒介的作用在多个种群之间相互传播,这种跨层的疾病传输方式更能体现现实社会中频繁、复杂的疾病传播行为。为更真实准确的探索传染病在不同群体之间的传播轨迹,构建切合实际环境的网络模型是非常关键的。基于该研究
目的铝(Al)是一种神经毒素,在人体生命进程中逐渐在大脑中积累,从而导致与阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)等疾病相关的氧化性脑损伤。本研究通过研究在铝暴露后大鼠学习记忆情况,大鼠大脑海马区神经细胞形态,激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)基因和蛋白水平及神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、神经营养因子3(neurotr
目的:观察桑杏止咳方联合常规治疗对AECOPD(燥邪伤肺证)患者的疗效。方法:选取符合AECOPD诊断标准,同时符合中医燥邪伤肺证的患者60例,以随机信封法分成试验组及对照组各30例。对照组给予常规西医治疗,试验组在单纯常规西医治疗的基础上加用桑杏止咳方,疗程共为2周,观察患者治疗前后慢阻肺的临床症状评分、CAT评分,mMRC分级。结果:1.治疗后两组患者慢阻肺的临床症状评分、CAT评分较治疗前均
目的分析2014-2019年云南省蒙自市城区中小学生的健康体检资料,掌握当地中小学生身体形态、营养状况、生理机能和常见病等指标的分布特征及变化规律,了解学生存在的健康问题,提出改善建议,为当地教育、卫生相关部门制定学校卫生工作发展规划、科学开展学校卫生工作提供参考依据。方法采用普查方法收集云南省学生健康体检信息管理系统中2014-2019年蒙自市城区共13所中小学校学生的健康体检资料,其健康体检过
目的:探讨宫颈HR-HPV持续性感染的影响因素及中医证型归属特点。方法:采用病例对照研究,通过对在新疆医科大学第四临床医学院妇科门诊就诊行宫颈癌筛查(HPV联合TCT)且符合纳入、排除标准的女性人群进行宫颈HR-HPV感染影响因素及中医证候四诊信息的问卷调查并定期随访,对其一般情况及社会经济学特征、生活方式情况、女性生殖健康史及认知情况、性生活情况、中医分型及治疗情况五部分相关因素进行统计学分析;
目的:通过调查分析围绝经期焦虑症与西北燥证之间存在的相关性进行研究,为现代中医药在新疆地区的围绝经期焦虑症的防治提供有关理论资料。方法:采取横断面调查方法,对401例(40-60岁)年龄阶段的女性一般情况(性别、年龄、职业、居住地址)、月经情况(初潮、周期、经期等)以及孕次、产次的情况、《改良Kupperman评分量表》、焦虑自评量表(SAS)评分标准、中医症状调查表、西北燥证评分表等一系类相关的
目的:观察传统针罐联合浮针治疗带状疱疹恢复期疼痛的临床疗效,为扩展带状疱疹的治疗方法提供临床依据。方法:将符合入组标准的68例患者采用随机信封分2组,其中试验组(34例)采用浮针配合针罐治疗,对照组(34例)采用传统针罐治疗。签署知情同意书、填写相关量表,1周为1疗程,两组均连续治疗2个疗程。采用VAS疼痛评分、皮肤病生活质量调查表(DLQI)、简化Mc Gill疼痛问卷(SF-MPQ),观察患者
目的:观察中药(温肺脱敏汤)联合穴位埋针对治疗肺脾气虚型变应性鼻炎的临床疗效观察,评价其优效性,为中药联合穴位埋针治疗本病提供理论依据。方法:此次研究所纳入的临床病例均来自于2020年09月至2020年12月就诊于新疆维吾尔自治区中医医院耳鼻喉科门诊,门诊诊断为变应性鼻炎,中医辩证为肺脾气虚型的患者共60例,随机分为两组,温肺脱敏汤联合穴位埋针为试验组(30例)、单独服用温肺脱敏汤为对照组(30例
目的本研究采用氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)暴露小鼠巨噬细胞样细胞系(Raw264.7)制备细胞迁移模型,观察组蛋白去乙酰化酶9(Histone deacetylases9,HDAC9)与Toll样受体4(Toll like recepter4,TLR4)之间变化规律,经细胞功能获得或缺失实验,证实HDAC9和TLR4在巨噬细胞迁
目的:通过博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化模型,研究紫檀芪(pterostilbene,PTE)对肺纤维化疾病的作用,以期为临床用药提供参考。方法:预先选用40只6～8周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠进行实验用来确定紫檀芪对小鼠肺纤维化的最佳治疗剂量。然后再选用120只同周龄和同类型的健康小鼠进行实验。小鼠被随机分为正常对照组(Control组)、模型组(BLM组)、正常