第一部分 UPLC-MS/MS法检测独一味胶囊中6种主要成分含量及其在大鼠体内药代动力学研究　　目的：建立超高效液相串联质谱法快速测定独一味胶囊口服和静脉给药后大鼠体内8-O-乙酰山栀苷甲酯、山栀苷甲酯、胡麻属苷、类叶升麻苷、木犀草素和木犀草苷等6种独一味活性成分的浓度。　　方法：称取适量独一味胶囊中粉末经超声过滤处理分别以灌胃和舌下静脉方式对SD大鼠给药，按设立的时间点对SD大鼠尾静脉取血约0.3mL，用乙腈沉淀蛋白法处理血浆，使用ACQUITY UPLC BEH C18(50mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱；流动相为乙腈-0.1％甲酸水，采用梯度洗脱方法，流速为0.4 mL/min；使用正离子多离子反应监测（MRM）扫描，内标为地西泮。　　结果：血浆中六种成分在浓度范围内均显示良好的线性( r>0.99)，最低定量限的范围为0.1-2.5 ng/mL。方法日内精密度（RSD）的范围为1.20%-8.84%，日间精密度在2.40%-8.05%的范围内；提取回收率均大于73%；各成分基质效应在(92.15±5.58)%和(104±5.65)%之间，基质对检测不造成影响；六种成分高、中、低浓度的短期，长期及反复冻融稳定性RSD均小于15%，表明样品中六种化合物在24h内，在-80℃条件及反复冻融情况下都有较好的稳定性。　　结论：我们的研究结果证明，超高效液相串联质谱法操作简便、快捷，灵敏度高，能够快速有效地对大鼠血浆中8-O-乙酰山栀苷甲酯、山栀苷甲酯、胡麻属苷、类叶升麻苷、木犀草素和木犀草苷等6种活性成分浓度进行测定并成功应用于药代动力学研究。　　第二部分独一味中六种有效成分对马西替坦在大鼠体内外代谢的影响　　目的：建立UPLC-MS/MS高效准确检测生物样品中马西替坦及其代谢产物ACT-132577的方法。研究马西替坦和藏药独一味合用时独一味对马西替坦在大鼠体内代谢的影响。建立马西替坦体外孵育体系并摸索其具体孵育条件，并在此体系下研究独一味中6种有效成分8-O-乙酰山栀苷甲酯、山栀苷甲酯、胡麻属苷、类叶升麻苷、木犀草素和木犀草苷分别对马西替坦在大鼠体外代谢的影响。方法：1）以ACQUITY UPLC BEH C18柱(50mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱；流动相为乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脱；使用正离子多离子反应监测（MRM）扫描的UPLC-MS/MS方法测定底物马西替坦及其代谢物ACT-132577的浓度。　　2）12只SD雄性大鼠随机分成两组，以单独服用马西替坦为对照组，共同服用马西替坦和独一味为实验组，给药后0.083，0.25，0.5，1，1.5，2，4，6，8，12和24 h尾静脉采血，离心取血浆经乙腈蛋白沉淀处理，通过UPLC-MS/MS法检测大鼠血浆中马西替坦和代谢产物ACT-132577的血药浓度，应用软件DAS进行药动学分析及SPSS17.0进行统计学分析。　　3）经摸索确立大鼠肝微粒体代谢马西替坦的体外孵育体系的条件，体外孵育体系共200μL，其中包括大鼠微粒体4μL，1-25μM的马西替坦溶液以及100mM Tris-HCl缓冲液（PH=7.4），37℃水浴中预孵育5min，加入10μL的NADPH启动反应进行，孵育时间为20min。样品经乙腈沉淀蛋白处理，用上述UPLC-MS/MS方法同时测定马西替坦和代谢产物ACT-132577的浓度，计算相应的酶动力学参数并作图。　　4）在上述200μL体外孵育体系中分别加入浓度梯度为0.001~100 mM的8-O-乙酰山栀苷甲酯、山栀苷甲酯、胡麻属苷、类叶升麻苷、木犀草素或木犀草苷，于37℃水浴中孵育20 min。终止反应后，样品经处理，用UPLC-MS/MS法测定马西替坦和代谢产物ACT-132577，并计算其在各个不同微粒体孵育体系中的IC50值。　　结果：1）建立了灵敏可靠的检测血浆中马西替坦及其主要活性代谢产物ACT-132577的UPLC-MS/MS方法。血浆中两种成分在浓度范围内均显示良好的线性( r>0.99)，最低定量限的范围为10ng/mL。方法日内精密度（RSD）的范围为2.9%-8.8%，日间精密度在5.9%-11.8%的范围内；提取回收率均大于80.2%；基质效应在92.98-102.68%之间，基质对检测不造成影响；样品稳定性良好。　　2）独一味对马西替坦在大鼠体内代谢的影响实验显示与对照组相比，实验组马西替坦AUC0→∞和 AUC0→t显著增大，约为对照组的1.5倍，而其代谢产物AUC0→∞和 AUC0→t相应减小(*P＜0.05)。VZ和CL显著减小，约为对照组的1/2。　　3）在确立的大鼠肝微粒体代谢马西替坦的体外孵育体系中，木犀草素在0.001~100μM的浓度范围对马西替坦表现出不同程度的抑制作用。在体外大鼠肝微粒体体系中，木犀草素IC50为6.287μM。而在体外大鼠肝微粒体体系中未发现独一味其它5种活性成分对马西替坦代谢有明显影响。　　结论：　　结合体内外实验结果，独一味中木犀草素在一定浓度范围内会影响治疗PAH药马西替坦的药代动力学过程。因此，在马西替坦在与独一味合用时，应该注意马西替坦的用药剂量。