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双生病毒科病毒是植物病毒中唯一具有单链环状DNA(single stranded DNA，ssDNA)病毒。已有的研究发现双生病毒的种群结构类似准种(qluasispecies)，而且重组是双生病毒进化的重要驱动力。为研究双生病毒准种种群在单个植株内系统扩散和植株间传播过程中的变化以及重组频率，需要一个遗传标记的病毒群体。本论文以已有的中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)Y10侵染性克隆(TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A)为材料，通过overlap PCR技术，在不改变编码氨基酸的前提下分别在基因组的IR5、区第45位碱基以T替代C，创造含MluI酶切位点；AV2区第277位碱基以T替代为A，以及第281位碱基A替代为C，创造Sac I酶切位点；AV1区第575位碱基以C替代G，创造Mlu I酶切位点；AC1区第1675位以碱基A替代为G，创造Sma I酶切位点的突变体4个。酶切和测序结果表明以上酶切位点已经被正确引入，接种本氏烟的结果初步显示，带有分子标记的TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A侵染性克隆突变体具有侵染性。这些突变体的在本氏烟和番茄等寄主上的积累水平和相对适应性有待进一步确认。