目的:通过对TSN提取物诱导人慢性髓系白血病K562细胞凋亡和抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的试验,探讨TSN提取物的抗肿瘤活性及其作用的分子机制。方法:1.自建改良的超声波萃取-高效液相色谱法分离、检测川楝树树皮提取物中的TSN,建立一种简便、快速、准确的实验室少量制备和鉴定TSN的方法。2.用不同浓度的TSN提取物处理K562细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;Wight’s染色,在普通光镜下观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化; Annexin V/PI双标记法检测早期和晚期凋亡效应的变化;DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA片段化;比色法检测Caspase-3、8、9相对活性的改变;RT-PCR检测凋亡相关基因P21、Bcr/abl、H-ras mRNA表达水平的改变。3.采用小鼠H22肝癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验,观察荷瘤小鼠的生长情况和肿瘤生长曲线,测定肿瘤生长抑制率;摘取脾脏、胸腺和肺,计算脾指数、胸腺指数和结节抑制率;肿瘤组织和肝脏组织的病理学切片进行HE染色形态学观察,肿瘤组织的超微结构行透射电镜观察;采用免疫组织化学法检测肿瘤组织细胞Bax、Bcl-2、Fas的表达。结果:1. TSN在4.64～88.2μg/ml浓度范围内有良好的线性关系(r=0.9996),测定方法平均加标回收率为100.83%,精密度试验RSD为1.42%,稳定性试验RSD为2.26%。提取物中TSN经HPLC分离提纯后纯度达96.32%。2. TSN提取物显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用72h的IC50=2×10-8mol/l;处理组细胞在普通光镜下可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和Annexin V/PI双标记检测表明TSN提取物可诱导K562细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的梯形条带;处理组细胞Caspase3、8、9的活性均显著增加;P21、H-ras表达上调,bcr/abl表达下调。3. TSN提取物对小鼠的H22实体瘤生长具有明显的抑制作用,抑瘤率达50%以上。TSN提取物组小鼠的肿瘤生长较对照组慢。脾指数和胸腺指数明显低于对照组(P<0.01),结节抑制率明显高于对照组(P<0.01)。组织学观察显示,肿瘤细胞大量变性坏死,电镜下可见凋亡细胞和凋亡小体。结论:TSN提取物具有较强的体内、体外抗肿瘤作用,作用机制可能与Caspase信号途径的活化,尤其是线粒体途径有关。