兔移植静脉重塑进程中凋亡及增殖的时间特性

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jay2048
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目的:建立兔自体静脉移植再狭窄模型,采用形态学观察、免疫组化、TUNEL法、电镜观察以及Western Blot等多种研究手段,研究移植静脉重塑过程中凋亡水平及增殖的时间特性,以期为预防移植静脉再狭窄提供调控、干预的时间点。方法:对42只健康纯种新西兰大耳白兔建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型。将其分为7组,分别于术前、术后第1天、术后第3天、术后第7天、术后第14天、术后第28天以及术后第90天将移植静脉取出,并对其进行狭窄程度、PCNA蛋白水平、凋亡及透射电镜等相关检测。结果:1、内膜厚度正常静脉组为(4.66μm±0.6μm);术后第1天开始略有下降(1.47μm±0.3μm),与正常静脉组比较差异有显著性(P<0.05);至术后第3天组之后持续上升,术后第三天组(3.41μm±0.2μm),术后第7天组(18.1μm±2.5μm),术后第14天组(35.7μm±5.1μm),术后第28天组(65.5μm±5.0μm),术后第90天组(93.5μm±6.4μm),均高于正常静脉组,差异有显著性(P<0.05);中膜+外膜厚度正常静脉组为(6.4μm±0.9μm);术后持续升高。术后第1天组(8.5μm±1.1μm),术后第3天组(15.6μm±1.9μm),术后第7天组(45.6μm±5.0μm),术后第14天组(62.3μm±2.7μm),术后第28天组(123.9μm±5.6μm),术后第90天组(130.6μm±10.0μm),均高于正常静脉组,差异有显著性(P<0.05)。2、Western Blot示:PCNA目的条带与内参条带灰度百分比在正常静脉组为40.6%±2.4%;术后第一天组(36.5%±5.1%)低于正常静脉组,差异有显著性(P<0.05);之后开始上升,术后第三天组(43.6%±4.4%),高于正常静脉组,差异有显著性(P<0.05);至术后第7天组到达最高峰(77.9%±7.1%),高于正常静脉组,差异有显著性(P<0.05),高于术后第一天组,差异有显著性(P<0.05);之后缓慢下降。3、免疫组化示:PCNA阳性细胞百分比在正常静脉组为(6.07%±1.1%);术后第1天开始略有下降(5.05%±0.9%),与正常静脉组比较差异有显著性(P<0.05);至术后第3天组开始上升(11.26%±1.6%),与正常静脉组比较差异有显著性(P<0.05);至术后第7天达到高峰(31.2%±3.4%),高于正常静脉组,差异有显著性(P<0.05),高于术后第一天组,差异有显著性(P<0.05);之后缓慢下降4、TUNEL法示:凋亡细胞在正常静脉组表达极少,为(1.49%±0.2%),术后第1天即达高峰(18.02%±1.9%),与正常静脉组比较差异有显著性(P<0.05);至术后第3天组开始下降(7.29%±0.7%),与正常静脉组比较差异有显著性(P<0.05);至术后第7天降为(2.09%±0.5%),与正常静脉组比较差异有显著性(P<0.05);之后持续维持在低水平。5、透射电镜观察显示术后第一天组电镜下可见核仁消失、染色质边集;术后第3天组可见合成型平滑肌细胞,含大量高尔基体以及粗面内质网。以及凋亡晚期的标志性凋亡小体。术后第7天可见大量收缩表型平滑肌细胞,及其周围包绕的弹性纤维。以及大量胶原纤维。术后第14天组、术后第28天组依旧可见少量合成表型的平滑肌细胞以及大量收缩表型的平滑肌细胞,以及大量胶原纤维。结论:1、静脉移植术后增殖与凋亡共存,提示增殖和凋亡均参与移植静脉重塑进程。2、静脉移植术后1天至术后3天,凋亡水平较高;术后7天增殖水平较高。
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