第一部分¹⁸⁸Re标记胰岛素样生长因子-1类似物（IGF-1A）的实验研究一、¹⁸⁸Re-IGF-1A的制备目的研究标记率高且稳定的¹⁸⁸Re标记胰岛素样生长因子-1类似物（insulin-like growth factor 1 analogue, IGF-1A）的方法学。方法1.采用直接标记法标记经修饰的IGF-1A,改变标记条件:Tween80的用量从2～10μL、SnCl₂.2H₂O浓度变化从0.75～25mg/mL、IGF-1A的用量从20～100μg、淋洗液的体积从10～500μL;分别在不同时间点测定标记率。2.标记物中加入生理盐水或人血清后不同时间点测定其标记率。结果1.最佳¹⁸⁸Re标记方法为:将100μLSnCl₂.2H₂O（10mg/mL）加入50μL IGF-1A（2mg/mL）;300μL Na₃PO_.4和10μL0.1%Tween80混匀后加入50μL ¹⁸⁸ReO₄^-新鲜洗脱液;在IGF-1A体系中加入洗脱液体系,混匀,室温下反应30min;加入500μL NaH₂PO₄将pH值调节到7.0左右,标记完成。最高标记率为（94.07±0.32）%,胶体含量为（5.50±1.50）%。2.室温下放置6h标记率为（85.50±1.21）%,加入人血清放置24h后标记率为（76.57±9.96）%。结论用直接标记法进行¹⁸⁸Re标记IGF-1A,标记率高且稳定性良好。二、¹⁸⁸Re-IGF-1A与胰腺癌细胞结合及细胞杀伤效应实验目的研究¹⁸⁸Re-IGF-1A与胰腺癌细胞的特异性结合及其对胰腺癌细胞的杀伤效果。方法1.测定¹⁸⁸Re-IGF-1A与胰腺癌Patu8988细胞的结合率。2.用MTT实验检测给药后细胞增殖情况,将1×10⁴/孔细胞接种于96孔板上,细胞分为对照组、IGF-1A组（1、5、10、20μg）、¹⁸⁸ReO₄^-组（0.37、1.85、3.70、7.40MBq）和¹⁸⁸Re-IGF-1A组（0.37、0.74、1.85MBq）,另设空白调零组。3.¹⁸⁸ReO₄^-组和¹⁸⁸Re-IGF-1A组接种后,分别在给药后1～7d,每天采用MTT比色法测定其OD值,IGF-1A组分别在给药后1～6d,每天采用MTT比色法测定其OD值。根据各组OD值,计算生存率和抑制率。4.将细胞接种于培养瓶中,分¹⁸⁸ReO₄^-组和¹⁸⁸Re-IGF-1A组（1.85、3.70、7.40MBq）,在给药后3d用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果1.¹⁸⁸Re-IGF-1A与5×10⁶个/50μL胰腺癌细胞的最高总结合率为（24.13±2.03）%,特异性结合为12.68%。2.加入不同剂量¹⁸⁸Re-IGF-1A后,在1～3d内,随时间增加而抑制率增高,第3d时0.37、0.74、1.85MBq组抑制率分别为（64.48±4.18）%、（66.89±1.39）%和（89.71±1.27）%;第6天时,1.85MBq组抑制率达到（93.20±1.93）%。3.加入与¹⁸⁸Re-IGF-1A同量的IGF-1A或相同放射性活度的¹⁸⁸ReO₄^-后,¹⁸⁸Re-IGF-1A对细胞的抑制率在各时间点均高于单独用¹⁸⁸ReO₄^-,两者差异有统计学意义（P<0.05）;与IGF-1A组比较,第1d差异无统计学意义,在第2～6d,¹⁸⁸Re-IGF-1A对细胞的抑制率在各时间点均高于单独用IGF-1A,两者差异有统计学意义。4.给药1.85、3.70、7.40MBq3d后,¹⁸⁸ReO₄^-组和¹⁸⁸Re-IGF-1A组细胞漂浮率分别为（16.58±3.57）%、（24.58±6.50）%、（34.12±7.39）%和（16.56±0.95）%、（33.39±5.93）%、（43.76±1.38）%,漂浮细胞的凋亡率分别为（9.27±1.80）%、（16.00±1.15）%、（15.47±0.65）%和（12.70±2.27）%、（17.80±1.51）%、（23.23±1.22）%。结论¹⁸⁸Re-IGF-1A能与胰腺癌Patu8988细胞特异性结合,并对胰腺癌细胞生长有明显的抑制作用,可诱导细胞凋亡。三、¹⁸⁸Re-IGF-1A在荷瘤裸鼠体内分布、显像和吸收剂量估算目的研究¹⁸⁸Re-IGF-1A在荷人胰腺癌裸鼠体内的分布、显像和剂量估算。方法1.建立荷人胰腺癌Patu8988裸鼠模型。2.将66只荷人胰腺癌裸鼠随机分2组,¹⁸⁸Re-IGF-1A组36只,¹⁸⁸ReO₄^-组30只。采取瘤内注射给药方式,注射¹⁸⁸Re-IGF-1A或¹⁸⁸ReO₄^- 0.03mL,同时取0.05mL¹⁸⁸ReO₄^-洗脱液做标准源。在瘤内注射后即刻行SPECT平面显像,通过裸鼠全身与标准源的ROI计数比值,换算每个荷瘤裸鼠总注射剂量。3.¹⁸⁸Re-IGF-1A组于注射后15min、1、4h、1、3、5d显像并处死裸鼠。¹⁸⁸ReO₄^-组于注射后15min、1、2、4、24h显像并处死裸鼠。解剖后取所需组织称量并测量其60s的放射性计数,计算各组织的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）,并计算肿瘤与血、心、脑、甲状腺、肝、脾、肺、肾、胃、肠、胰、骨、肌肉的比值（T/NT）。4.根据各组织不同时间点的平均%ID/g,通过放射性药物内照射剂量计算软件计算出吸收剂量（mGy/MBq）。结果1.瘤内注射¹⁸⁸Re-IGF-1A后肿瘤、肾脏、肝脏、脾脏内放射性较高,注射后15min肿瘤摄取为（39.30±17.98）%,肾脏摄取为（19.77±10.75）%,肝脏摄取为（2.03±2.28）%,脾脏摄取为（1.04±0.92）%。瘤内注射后1、4h、1、3、5d肿瘤内摄取分别为（35.03±23.37）%、（41.22±23.88）%、（10.59±9.39）%、（5.32±1.53）%、（5.30±2.28）%;肿瘤部位放射性积聚量4h内差异无统计学意义（P>0.05）,且随时间延长,肿瘤与其它脏器的T/NT呈上升趋势,肿瘤与肾脏的T/NT在5d时达到5.64±7.50。肿瘤/肌肉在5d时达到2610.65±1534.02。2.瘤内注射¹⁸⁸ReO₄^-后,在体内开始主要分布于甲状腺、胃、肿瘤、血液。胃内放射性高峰出现在1h,为（23.14±12.08）%,甲状腺放射性高峰出现在2h,为（100.27±19.67）%,随时间延长,肿瘤部位计数迅速下降。肿瘤部位在24h摄取为（0.09±0.03）%,与肾脏差异无统计学意义（P=0.27）。3.在瘤内注射后各时间点,¹⁸⁸Re-IGF-1A组肿瘤及肾脏内摄取比¹⁸⁸ReO₄^-组高,两者有统计学差异（P<0.01）。两组肿瘤内摄取比值在24h达到117.67倍。4.瘤内注射¹⁸⁸Re-IGF-1A后,SPECT平面显像见瘤内浓聚,5d时仅见肿瘤部位显影。5.肿瘤内吸收剂量为5165.8mGy/MBq。结论瘤内注射¹⁸⁸Re-IGF-1A后,在肿瘤部位积聚较高,可望作为胰腺癌经动脉灌注治疗的药物,并能在体外观察其分布。第二部分¹⁸⁸Re标记反基因肽核酸（AGPNA）的实验研究一、k-ras-AGPNA抑制k-ras基因表达实验目的探索自主设计的与胰腺癌k-ras点突变基因特异性结合的反基因肽核酸（antigene peptide nucleic acid, AGPNA）的生物活性。方法1.设计并合成与胰腺癌k-ras点突变基因特异性结合的k-ras-AGPNA。2.应用RT-PCR检测转染k-ras-AGPNA前后胰腺癌Patu8988细胞k-ras癌基因的mRNA表达水平,分对照组、k-ras-AGPNA组、脂质体转染k-ras-反基因寡核苷酸（antigene oligonucleotides, AGON）组、脂质体转染k-ras-反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides, ASON）组。3.应用流式细胞仪测定转染k-ras-AGPNA前后胰腺癌Patu8988细胞的k-ras蛋白表达水平。结果1.转染1nmol/mL k-ras-AGPNA组和k-ras-AGON组的细胞的k-ras突变基因mRNA的灰度比分别为（1.00±0.39）和（1.22±0.31）,比对照组（1.86±0.07）低,差异有显著统计学意义（P<0.01）。k-ras-AGPNA、k-ras-AGON和k-ras-ASON组内不同剂量之间差异无统计学意义（P>0.05）。2.转染1nmol/mL k-ras-AGPNA、k-ras-AGON和k-ras-ASON组的细胞其k-ras蛋白表达分别为（15.05±5.07）%、（10.20±2.63）%、（8.80±4.31）%,比对照组（24.38±5.40）%低,差异有显著统计学意义（P<0.01）。k-ras-AGPNA、k-ras-AGON和k-ras-ASON组内不同剂量之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论自主设计并合成的k-ras-AGPNA能抑制k-ras基因在mRNA和蛋白水平的表达。二、¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA的制备及其胰腺癌细胞内化实验研究目的制备¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA并研究其与胰腺癌Patu8988细胞结合的特性。方法1.用¹⁸⁸Re直接标记经修饰的k-ras-AGPNA。2.预实验中其他标记条件不变,将SnCl2.2H2O浓度改为20mg/mL,k-ras-AGPNA的用量改为20μL（40μg）后分别进行实验。3.在标记后不同时间点15、30min、1、2、4、6h测定标记率。4.测定标记物在人血清和生理盐水中5min～24h不同时间点的标记率。5.胰腺癌Patu8988细胞摄取¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA的内化实验。结果1.¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA的标记率最高为（89.61±0.91）%,放射性胶体含量为（9.40±0.55）%。2.¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA放置血清中24h后标记率为（89.14±0.63）%,放置生理盐水中1h后标记率为（79.12±5.26）%。3.¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA转染胰腺癌Patu8988细胞,最高细胞结合率为（38.16±2.17）%,最高核内化率为（22.41±0.86）%。结论¹⁸⁸Re直接标记k-ras-AGPNA方法简便、标记率较高,能与胰腺癌细胞结合并转染入细胞核。三、¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA诱导细胞凋亡和荷瘤裸鼠体内分布实验目的研究¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA的诱导凋亡效应和在荷人胰腺癌裸鼠体内的分布、显像和剂量估算。方法1.胰腺癌Patu8988细胞给予¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA和¹⁸⁸ReO₄^- 3～5d后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。2.将28只荷人胰腺癌裸鼠分7组,每组4只。采取瘤内注射给药方式,注射¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA 0.03mL。3.注射后15min、1、4h、1、3、5、7d显像并处死裸鼠,解剖后取所需组织称量并测量其60s的放射性计数,计算各组织的%ID/g和肿瘤与其他组织的比值（T/NT）,并根据各组织不同时间点的平均%ID/g计算出吸收剂量（mGy/MBq）。结果1.给药3、4、5d后,¹⁸⁸ReO₄^-组和¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA组细胞漂浮率分别为（5.68±0.82）%、（8.14±0.12）%、（11.87±0.17）%和（5.99±3.59）%、（25.66±8.51）%、（29.59±4.92）%,漂浮细胞的凋亡率分别为（3.88±2.10）%、（8.75±3.11）%、（16.87±5.85）%和（5.28±1.12）%、（26.30±7.45）%、（27.90±10.38）%。2.瘤内注射¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA后肿瘤、肾脏、肺、甲状腺、肝脏内放射性较高,注射后15min肿瘤摄取为（53.23±16.64）%,肾脏摄取为（12.60±1.53）%,肺内摄取为（2.32±1.35）%,甲状腺摄取为（1.95±1.22）%,肝脏摄取为（1.78±0.63）%。瘤内注射后1、4h、1、3、5、7d肿瘤内摄取分别为（37.47±21.31）%、（34.84±6.46）%、（35.96±7.80）%、（17.43±5.46）%、（11.09±3.52）%、（15.46±4.93）%;肿瘤部位放射性积聚量24h内差异无统计学意义（P>0.05）,且随时间延长,肿瘤与肾脏的T/NT呈上升趋势,在7d时达到11.08±9.22。肿瘤/肌肉在3d时达到870.86±1079.02。3.瘤内注射¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA后,SPECT平面显像见瘤内浓聚,7d时仅见肿瘤部位显影。4.肿瘤内吸收剂量为15569mGy/MBq。结论瘤内注射¹⁸⁸Re-k-ras-AGPNA后,肿瘤部位摄取高、清除缓慢,肿瘤吸收剂量高,可望作为胰腺癌治疗的药物。第三部分¹⁸⁸Re-锡硫胶体介入治疗荷VX2肝癌兔的体内生物分布研究目的研究¹⁸⁸Re-锡硫胶体（tin sulfur colloid,TSC）的制备及其经肝动脉灌注给药后在兔VX2肝肿瘤模型体内的生物学分布特征,探讨其作为放射性介入治疗剂的可行性。方法1.改变标记条件制备¹⁸⁸Re-TSC和¹⁸⁸Re-聚合白蛋白（Macroaggregated albumin, MAA）,检测标记物在人血清中的稳定性,测定¹⁸⁸Re-TSC的颗粒大小。2.建立32只VX2肝肿瘤模型,均经CT或DSA证实,1例行病理学检查。3.31只荷瘤兔分¹⁸⁸Re-TSC（n=12）、¹⁸⁸Re-MAA（n=15）和¹⁸⁸ReO4-（n=4）3组,将放射性药物经肝动脉注射入肿瘤内,分别在注射后15min、1h和24h分别进行SPECT平面显像,画感兴趣区进行肿瘤/肝脏计数的半定量分析。4.在注射后1h和24h处死模型兔后取感兴趣脏器进行称量、计数,计算各脏器的每克组织百分注射剂量。5.根据灌注¹⁸⁸Re-TSC后肿瘤内%ID/g进行吸收剂量估算。结果1.¹⁸⁸Re-TSC和¹⁸⁸Re-MAA标记率最高分别为（99.94±0.04）%和（99.95±0.03）%,在人血清中放置72h后分别为（95.77±0.54）%和（92.13±1.21）%。¹⁸⁸Re-TSC的颗粒大小分布为10.83±6.60μm （D10）、44.91±14.46μm （D50）和235.29±126.61μm （D90）。2.在平面显像中,62.96%（17/27）模型兔的肿瘤显像清晰,肿瘤/肝脏感兴趣区放射性计数的比值为2.15±0.80。3.¹⁸⁸Re-TSC组中肿瘤摄取在1h和24h分别为（24.32±11.93）%和（21.88±18.29）%,肿瘤与肝脏的放射性比值在1h和24h分别为70.89±19.58和17.42±13.96。4.¹⁸⁸Re-MAA组中肿瘤摄取在1h和24h分别为（38.78±30.23）%和（15.98±26.64）%,肿瘤与肝脏的比值在1h和24h分别为39.71±25.06和8.13±4.61。5.灌注¹⁸⁸Re-TSC后肿瘤内24h的放射吸收剂量为0.24 Gy/MBq。结论¹⁸⁸Re-TSC可望成为有临床应用前景的放射介入治疗药物。