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MADS-box基因是真核生物中一类编码转录调控因子的基因家族,在植物花器官发育中起重要的调控作用,在过去二十多年中相关研究已取得较大进展,如著名的花发育ABCE模型,但关于花的起源却是未解之谜。裸子植物作为被子植物亲缘关系最近的类群,将成为研究花起源分子机制的重要切入点。裸子植物MADS-box基因的研究多集中在银杏、松柏类与买麻藤类中,苏铁类的相关研究却比较缺乏,因此我们利用越南篦齿苏铁(Cycas elongata)转录组数据挖掘获得12条MADS-box相似序列,并在8种不同组织中对12个基因进行空间表达模式的分析。获得的12条MADS-box基因,其中2条属于I型基因,10条属于MIKCC型基因。通过系统进化树构建将基因归到10个基因亚族中:AG、GGM13(Bsister)、AGL6、TM8、GGM4、GpMADS4、TM3、SVP、GGM19、GGM7和I型(Mβ+Mγ)。Type I型基因CeMADS11、12在营养器官与生殖器官中均有表达。MIKCC型基因中,CeMADS1、3、4三个基因在生殖器官中特异表达,CeMADS2以及CeMADS5-10共七个基因在生殖器官与营养器官中都有表达。除了GpMADS4亚族为裸子植物特有亚类外,其他亚族MADS-box基因的功能在种子植物进化过程中都相对保守。特别是花发育相关的B、C和E(AGL6-like)型同源基因,至少在3亿年前就已经存在于裸子植物与被子植物的共同祖先中,并且参与调控生殖器官的生长与发育。荧光定量PCR是研究基因表达量的重要技术手段,具有灵敏度高、实时性强、准确性上佳的特性,为了消除cDNA在合成过程中由于RNA本身纯度、产量、完整性和扩增酶效应以及PCR扩增效率等因素带来的误差,需要选用稳定的内参基因对目标基因进行相对定量分析。基于本研究对MADS-box基因表达模式分析的需求,并且现在并无苏铁类内参基因相关报道的事实,本研究利用越南篦齿苏铁转录组数据,挖掘并鉴定了13个内参基因(ACT7、TUB、UBQ、EIF4、EF1、CLATHRIN1、PP2A、RPB2、GAPC2、TIP41、MAPK、SAMDC和CYP),在越南篦齿苏铁8种不同组织器官中进行qRT-PCR,并使用NormFinder、GeNorm和BestKeeper三个软件进行内参基因稳定性评估,最后获得最稳定的内参基因为GPAC2和RPB2,最不稳定的内参基因是ACT7。据我们所知,这是首次在越南篦齿苏铁中克隆得到多个MADS-box基因并进行表达模式的分析,对裸子植物中苏铁类MADS-box基因数据的空缺进行了填补,为从分子层面解释花起源的机制提供了可能;同时这也是首次在越南篦齿苏铁中分离并筛选评估出稳定内参基因,为苏铁类植物分子生物学相关研究提供了重要参考。