目的：高磷是慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者血管中膜钙化的一个独立危险因素，可引起心血管事件等严重并发症，其诱导钙化的机制可能是通过血管平滑肌细胞（VSMC）膜上的Ⅲ型钠磷转运体（Pit-1）进入细胞内，引起VSMCs表型转化而发生钙化。进一步研究显示镁离子既可以抑制Pit-1通道活性而减少磷向细胞内转移，又可以竞争性地拮抗细胞内的磷，对细胞内的磷水平的调节起一定的作用，但镁离子与血管平滑肌细胞钙化的关系目前尚不清楚。本研究旨在通过高磷诱导的VSMCs钙化模型来探讨镁离子和VSMCs钙化两者之间的关系，以明确镁离子在VSMCs钙化中的作用。方法：1VSMCs原代培养运用组织块贴壁法原代培养获取VSMCs，进行形态学及免疫细胞鉴定，并绘制正常平滑肌细胞生长曲线。2实验分组及处理VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组及镁干预组，阴性对照组采用低糖DMEM含10%胎牛血清的正常培养基，高磷组在正常培养基的基础上加入10mmol/L β-甘油磷酸制成高磷培养基，镁干预组在上述高磷培养基的基础上加入氯化镁，使镁离子的终浓度分别为1mmol/L（镁干预组1）、2mmol/L（镁干预组2）和3mmol/L（镁干预组3），共刺激7d。3不同浓度镁离子对VSMCs钙化的影响VSMCs钙化检测分别用茜素红（Alizarin red stain）钙化染色和比色法测定细胞内钙含量的方法。4不同浓度镁离子对钙化的VSMCs碱性磷酸酶（ALP）活性的影响取3～5代细胞接种于6孔板，细胞密度约为2×105/孔，干预时间为7d，弃去培养基，PBS洗涤细胞2～3次，每孔加入500μL0.1％TritonX-100置4℃环境中约12～24h，然后反复吹打裂解细胞后置于离心管中离心，按化学发光法检测ALP活性。5不同浓度镁离子对钙化的VSMCs Cbfα1mRNA表达的影响运用RT-PCR方法研究不同浓度镁离子对VSMCs中Cbfα1mRNA水平表达的影响。6统计学处理数据统计采用SPSS13.0软件进行分析，实验结果用均数±标准差（x s）表示，两组间均数比较用t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析（ANOVA），多组间均数两两比较用SNK检验（Student-Newman-Keuls），以P<0.05为差异有统计学意义。结果：1VSMCs原代培养采用组织块贴壁法获取原代大鼠VSMCs，通常情况下贴壁的动脉组织块约3～4d后可爬出少许细胞，以长梭形为主，排列较分散，随着时间延长细胞数目显著增多，约6～7d细胞可铺满大部分瓶底。当细胞数目占瓶底面积的80～90%时可传代，传代后细胞起初为圆形或椭圆形，贴壁后可逐渐伸展为梭形，胞浆丰富，核呈圆形或卵圆形，多个细胞交错重叠生长，呈典型的“峰-谷”样。用免疫细胞化学法检测平滑肌细胞特异性的抗体—α-平滑肌肌动蛋白抗体（α-SMA actin），其阳性结果为细胞胞浆强表达，呈棕黄色的免疫反应产物。2不同浓度镁离子对VSMCs钙化的影响运用茜素红钙化染色对VSMCs染色结果示：各实验组与阴性对照组相比，VSMCs钙化染色均不同程度地加重，而镁干预组与高磷组比较，随着镁离子浓度的增大钙化结节染色程度逐渐降低，当镁离子浓度为2mmol/L开始出现钙化结节缩小，呈浓度依赖性，3mmol/L时钙化结节显著降低，达最小状态。运用比色法测定VSMCs内钙含量结果示：与阴性对照组相比，高磷组及镁干预组刺激VSMCs后，钙含量均显著增加，镁干预组与高磷组相比，钙含量随着镁离子的变化而变化，其结果呈负相关，即镁离子浓度越大，钙含量越低，并当镁离子浓度为2mmol/L开始钙含量明显降低，当镁离子浓度达3mmol/L时，钙含量检测结果也相应达最小值，且各组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。3不同浓度镁离子对钙化的VSMCs ALP活性的影响镁离子刺激VSMCs后不同组间ALP结果示：与阴性对照组相比，高磷组及镁干预组VSMCsALP水平均不同程度地增加。镁干预组与高磷组比较，随着镁离子浓度的增大，ALP活性的变化趋势与钙含量结果相似，亦呈浓度依赖性，3mmol/L时ALP活性达最小值。4不同浓度镁离子对钙化的VSMCs Cbfα1mRNA表达的影响不同浓度镁离子刺激VSMCs后不同组间Cbfα1mRNA的表达结果示：与阴性对照组相比，高磷组及镁干预组的VSMCs Cbfα1mRNA水平均不同程度地增加，而镁干预组与高磷组比较，随着镁离子浓度的增大，Cbfα1mRNA水平也相应发生变化，变化趋势与镁离子浓度相关，呈浓度依赖性，当镁离子浓度为3mmol/L时mRNA水平降至最低，不同组间比较具有统计学意义。结论：1镁离子可抑制高磷诱导的VSMCs钙化，且呈浓度依赖性。2镁离子抑制高磷诱导VSMCs发生钙化的机制可能是通过抑制VSMCs转分化作用来实现的。