本文基于荧光量子点优良的光学性质以及独特的闪烁特性,以荧光量子点为标记探针,在荧光相关光谱(FCS)和全内反射荧光成像(TIRFM)等分析平台上建立了凝血酶的灵敏度高、特异性好的单颗粒探测新方法。主要工作如下:一、利用荧光量子点的强荧光发射的优势,以核酸适配体为待测分子的识别分子,基于荧光相关光谱(FCS)技术,建立了一种凝血酶的高灵敏、特异性好的单分子检测方法。以量子点为荧光探针修饰核酸适配体,而随着凝血酶的加入,由于量子点上核酸适配体与凝血酶发生结合作用而团聚,导致凝血酶加入前后溶液中粒子的平均粒径发生显著变化。而FCS方法可以测定其特征扩散时间来反映这一粒径变化,即随着粒径越大,其特征扩散时间也越大。本文系统地研究了量子点标记核酸适配体过程、核酸适配体与量子点反应产物的分离方法、夹心反应过程中反应体系的盐浓度、核酸适配体与量子点的反应比例、荧光探针浓度、反应时间等条件对分析方法灵敏度的影响;优化条件下,测得特征扩散时间的对数值与凝血酶浓度的对数值呈现良好的线性关系,其线性范围为5 n M~500 n M,检测限为2.6 n M。并将该方法用于人血清中凝血酶的测定分析。二、利用量子点从闪烁到无闪烁的变化,建立了一种基于全内反射成像(TIRFM)的凝血酶高灵敏、特异性好的单颗粒计数新方法。量子点的闪烁是单个量子点发光性质,当量子点发生聚集时闪烁特性消失。以凝血酶与其核酸适配体相互作用为模型,利用表面修饰核酸适配体的量子点作为荧光探针,随着凝血酶的加入导致荧光量子点发生团聚,使得无闪烁的量子点的数量增加,从而导致无闪烁的量子点在总量子点中的比例(α值)增加。通过研究α值与凝血酶浓度的关系曲线,建立了一种凝血酶的单颗粒计数测定新方法。系统研究了阈值设定、优化修饰比例、荧光探针浓度等条件对该分析方法灵敏度的影响。并通过荧光寿命和TEM的表征证实了我们分析方法的可行性。在最优条件下,α值与凝血酶浓度之间有良好线性关系,线性范围为5 nM~100 nM,检测限为4.2 nM。这一分析方法可以成功地用于凝血酶的检测分析。我们希望所建立的分析方法可以拓展应用于检测更多的目标分子。