急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）是一种常见的血液系统恶性肿瘤。成人总体发病率75.3/10万人，死亡率53.4/10万人，发病率和死亡率在成人所有恶性肿瘤中位居第13位及第9位。目前AML治疗进展缓慢，尽管对AML的生物学特征的理解日渐深入，新的靶向治疗药物被研发使用，但总体生存率仍低。具有自我更新能力的白血病干细胞是白血病细胞恶性增殖的“罪魁祸首”，而这些细胞具有高增殖、低凋亡、分化阻滞、耐药等特性，导致白血病病人在化疗放疗得到完全缓解后复发率仍非常高。AML 发病机制复杂，异质性极高，绝大部分类型治疗效果差，预期生存期短。分子生物学特征是判断AML预后的重要标志之一。超过95%的AML病人至少携带1种体细胞突变。目前临床常用预后相关基因仍然存在较大局限性。因此发现新的预后因素，探索其功能，阐明在AML环境中的作用机制，在AML诊断及治疗中具有重要意义。　　络氨酸激酶受体 ErbB2 (v-erb-b2 avian erythroblast leukemia viral oncogene homolog 2)基因，也被称为HER2 (human epidermal growth factor receptor 2)作为一种癌基因已被广泛研究和认知。它通过激活经典络氨酸激酶下游分子如RAS、MAPK，诱导肿瘤细胞有丝分裂增强，并由此导致多种肿瘤预后不良。2000年，Borg通过酵母双杂交法发现了一个新的PDZ (PSD95/discs large/ZO-1)蛋白，它在上皮细胞中作为ErbB2的交互作用蛋白发挥作用，故将其命名为Erbin (ErbB2 interacting protein，也称为Erbin)。Erbin属于一种全新的PDZ蛋白家族，称为LAP (leucine-rich repeat and PDZ domain)家族。Erbin的功能目前尚不十分清楚，其在大多数人组织中表达，在脑、心脏、肾脏、肌肉及胃组织中较为丰富，对维持细胞结构完整、调节细胞增殖和分化、发育过程中器官形态的发生及信号转导途径等具有重要作用。Erbin 在实体肿瘤的发生发展中的功能尚存在争议，在急性髓系白血病中的功能及机制尚不明确。　　miRNAs是一种广泛存在的对基因进行微调的分子，约占人类基因组总基因数的2％-3％。从结构上来说，miRNAs是一类长度很短的非编码调控单链小分子RNA，约22nt，通过5’端6-8个序列(种子序列)与其靶基因的mRNA分子的3’端非编码区域(3’UTR)互补配对在转录后水平上对基因的表达进行负调控，一个 miRNA 可以调控多个靶基因。miRNA可导致mRNA的降解或翻译抑制，从而进一步调控多种生物学行为如发育的进程、干细胞分化、细胞凋亡、疾病以及肿瘤发生等。既往研究表明，miR-183在肿瘤中通常呈高表达。miR-183在肿瘤细胞中高表达常伴随等位基因失衡，染色体断裂、复制数增加等，常表现为致癌作用。迄今为止，有关miR-183与Erbin在AML中的研究较少。本研究通过体外、体内实验及临床验证揭示了Erbin与AML发生、发展的关系，Erbin 在 AML 可抑制细胞增殖，促进幼稚细胞分化成熟，起抑癌作用。并通过生物信息学预测，体外实验验证miR-183-5p对Erbin在AML中的调控，通过免疫荧光素酶报告基因及功能挽救实验证实miR-183-5p对Erbin的直接靶向作用，表明miR-183-5p通过靶向Erbin调控AML的增殖、分化能力，miR-183-5p/Erbin通路是AML潜在的治疗靶点。　　第一部分 体外研究Erbin对AML细胞增殖、分化作用及信号通路的影响　　研究目的：通过体外实验探索及分析Erbin对AML增殖及分化功能的影响及相关机制。　　研究方法：通过定量PCR和Western Blot检测4种AML细胞株HL60、THP-1、SHI-1和U937中内源性Erbin表达，并挑选出相对表达高及低的细胞各1株。转染Erbin过表达质粒慢病毒使其在低表达细胞株中过表达，转染shRNA慢病毒使Erbin在高表达细胞株中下调。用过CCK8及流式细胞术检测上述两种细胞和各自空载体对照组细胞周期、增殖、凋亡及分化情况，以及与细胞周期调节蛋白p21Waf1/CIP1、p27Kip1表达的关系。　　结果：U937中Erbin相对表达量较高，HL60和SHI-1细胞中表达量较低，HL-60与SHI-1表达量无显著性差异。过表达Erbin的HL60细胞48h细胞活性较对照组显著降低，G2/M期细胞比例较对照组降低，凋亡率较对照组增高，细胞周期调节蛋白p21Waf1/CIP1、p27Kip1表达升高，分化程度较对照组升高。下调Erbin的U937细胞48h 细胞活性较对照组显著增高，G2/M 期细胞比例较对照组升高，p21Waf1/CIP1、p27Kip1表达减低，分化程度较对照组降。差异具有统计学意义。　　结论：体外Erbin在AML细胞中通过抑制细胞增殖、细胞周期，促进细胞凋亡及细胞分化来发挥抗肿瘤活性。　　第二部分 体内研究Erbin对AML增殖及分化的影响　　研究目的：体内实验验证Erbin对AML增殖及分化功能的影响。　　研究方法：构建裸鼠AML荷瘤及对照模型，对模型鉴定分析Erbin在体内的作用。肿瘤组织行免疫组化，外周血镜检髓系白血病细胞浸润程度，肝脏及脾脏行病理学活检，流式细胞术检测骨髓细胞CD33表达阳性率。　　结果：Erbin过表达HL-60组荷瘤小鼠较其对照组小鼠肿瘤体积小，免疫组化显示pRAF、pERK1/2、CD11b较对照组高表达，外周血涂片显示髓系白血病细胞浸润较对照组降低，骨髓细胞CD33阳性率较对照组降低，肝脏、脾脏HE染色光镜下原始细胞比例无显著差异； Erbin下调U937组荷瘤小鼠其对照组小鼠肿瘤体积大，免疫组化显示pRAF、pERK1/2、CD11b较对照组低表达，外周血涂片显示髓系白血病细胞浸润较对照组增加，骨髓细胞CD33表达较对照组升高，肝脏、脾脏HE染色光镜下原始细胞比例无显著差异。　　结论：Erbin 在体内可抑制 AML 细胞增殖、促进细胞凋亡及细胞分化，与体外实验的结果相符。　　第三部分 hsa-miR-183-5p直接靶向作用Erbin调控AML细胞的增殖　　研究目的：探讨miR-183-5p对Erbin的调控机制以及对AML细胞生物学行为的影响。　　研究方法：通过生物信息学预测，定量PCR在AML细胞株HL60及937中筛选可能调控Erbin的miR。定量PCR及Western blot验证目标miR对Erbin的调控。CCK8 及流式细胞术检测目标miR在HL60及937细胞中影响细胞周期、增殖、凋亡的情况，荧光素酶报告基因及功能挽救实验验证miR-183-5p与Erbin的直接结合作用。临床样本检测miR-183-5p/Erbin的表达水平。　　结果：经筛选miR-183-5p被认为可能参与调控Erbin。经PCR及Western blot验证，miR-183-5p可在mRNA及蛋白水平调控Erbin的表达。miR-183-5p通过调控Erbin的表达调节RAS/RAF/MEK/ERK和PI3K/AKT/FoxO3a通路的磷酸化水平，经CCK8及流式细胞术检测，miR-183-5p可调控HL-60/U937细胞的增殖、凋亡和细胞周期。免疫荧光素酶报告基因及功能挽救实验证实 miR-183-5p 与 Erbin 存在直接结合与调控。Erbin 在 AML 患者体内水平明显低于健康对照组，pri-miR-183-5p 及mature-miR-183-5p在AML患者体内水平显著高于正常对照组。差异具有统计学意义。　　结论：miR-183-5p通过与Erbin直接结合调控AML的增殖