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目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,以记忆减退、进行性认知功能障碍、人格变性为主要表现。AD是继心血管病、脑血管病、肿瘤之后,引起老年人死亡的第四大病因,是老年人认知障碍最常见的原因,严重影响患者的生活质量。但是,AD的发病机制尚未研究清楚,也没有可以治愈的药物。目前认为其发病可能与Aβ(β—amyloid peptide,Aβ)沉积、Tau蛋白过度磷酸化、氧化应激、炎症反应等相关,其中,Aβ在脑内的沉淀堆积可能是导致AD的根本原因。近年来,一些研究表明AD患者脑中有部分的miRNA表达的改变,并证明miRNA的表达失调可能在AD相关认知损害中起着重要的作用。有研究发现miR-142在AD中表达改变,miR-142前体经加工可产生成熟的两个miRNA,分别为miR-142-5p和miR-142-3p,成熟的miR-142在物种间具有高度的保守性,在多种肿瘤、免疫相关疾病和胚胎干细胞中均发挥了重要作用。此外,近年来研究表明,miR-142与衰老相关,miR-142在10月龄APP转基因小鼠脑中和AD患者海马中表达显著升高。另有研究表明,FMR1基因编码的脆性X智力低下蛋白(fragile X mental retardation protein,FMRP)在AD中表达下降,FMRP能结合并调控神经元胞质内多种mRNA的靶向转运与翻译过程。目前研究认为,由FMR1基因动态突变引起的FMRP不表达或低表达可影响神经元的发育成熟和突触可塑性。另有研究发现,miR-142和FMRP在AD中的表达变化对突触蛋白的表达有影响。因此,本实验采用western blot、免疫荧光、real-time PCR以及水迷宫行为学等实验方法研究分析miR-142是否通过结合FMR1基因,调控FMRP蛋白的表达,从而调控AD小鼠海马内突触相关蛋白的表达,进而改善AD小鼠学习及记忆能力,本研究拟为治疗阿尔茨海默症提供新的理论依据。研究方法:将10个月左右的APP/PS1小鼠分为AD组,sh-miR-NC组(通过侧脑室注射LV-sh-miR-NC,即sh-miR-142-3p空质粒),sh-miR组(通过侧脑室注射LV-sh-miR-142-3p),每组12只,同月龄的12只C57小鼠作为Control组。sh-miR-142-NC和sh-miR-142-3p注射剂量均为2ul/只。在室温24℃左右、湿度适宜的环境下饲养1周。1周后,各组小鼠进行Morris水迷宫实验并在实验结束后取材。通过western blot、免疫荧光等方法检测各组小鼠海马内FMRP和PSD95、Synapsin Ⅰ的表达水平。结果:1、morris水迷宫实验结果:为期5天的定位巡航实验结果表明,与Control组相比,AD组小鼠的逃避潜伏期显著延长(p<0.05);与AD组相比,sh-miR组的小鼠逃避潜伏期显著缩短(p<0.05);而AD组与sh-miR-NC组无显著差异。实验第6天,空间探索实验结果显示:与Control相比,AD组在平台靶象限活动时间显著缩短;与AD组相比,sh-miR组的小鼠的活动时间显著增长(p<0.05);AD组和sh-miR-NC组两组间无显著差异。上述结果表明miR-142-3p基因沉默能改善APP/PS1小鼠学习和空间记忆缺陷。2、Western blot和免疫荧光结果:与Control组相比,AD组小鼠海马中FMPR以及突触相关蛋白PSD95、Synapsin Ⅰ的表达水平均显著降低(p<0.05);与AD组相比,sh-miR组小鼠海马中FMRP、PSD95和Synapsin Ⅰ蛋白水平均显著升高(p<0.05);AD组和sh-miR-NC组两组间无显著差异。结论:1、抑制miR-142表达能够改善APP/PS1小鼠的学习记忆缺陷。2、miR-142通过结合FMRP影响APP/PS1小鼠海马内突触相关蛋白PSD95和Synapsin Ⅰ表达。