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第一部分喉鳞癌microRNA表达谱变化及候选靶基因分析背景：microRNA(微小RNA,简称miRNA)是一种非编码RNA,在恶性肿瘤的基因表达转录后调节中发挥作用。本部分研究miRNA在喉鳞癌组织中表达谱变化,为LSCC研究提供了新的方向。方法：通过激光显微切割技术(LCM)分离6例喉癌组织肿瘤细胞,采用miRNA芯片筛查喉癌组织与癌旁正常组织中miRNA表达谱变化,在48对喉癌组织及癌旁正常组织中,采用实时定量PCR技术验证miRNA芯片结果,通过生物信息学软件预测这些差异表达miRNAs的靶基因,在24对喉癌组织中检测候选基因的表达水平。结果：通过miRNA芯片检测,筛查得到29个差异表达的miRNAs,经过实时定量PCR验证后,有6个被证实包括表达上调的miR-21、miR-93、miR-205和miR-708,表达下调的miR-125b和miR-145。使用软件预测共有25个候选靶基因,经检测后有10个候选基因在LSCC中表达水平有差异。结论：这些差异表达的miRNA在喉癌的发生和演进过程中可能发挥了重要作用,并且为miRNA的功能研究提供了方向。第二部分miR-125b通过EIF2C2抑制喉癌Hep-2细胞增殖背景：失控的自主性增殖是恶性肿瘤细胞具有的主要特征之一,细胞周期控制紊乱导致肿瘤细胞增殖调控异常。本部分在体外和体内水平研究上调miR-125b对喉癌Hep-2细胞增殖的影响及机制。方法：采用慢病毒载体构建miR-125b表达载体,感染Hep-2细胞后建立能够稳定高表达miR-125b的稳转细胞株Hep-2-miR-125b和对照细胞株Hep-2-vector,WST-1实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。并将Hep-2-miR-125b和Hep-2-vector细胞接种NOD/SCID小鼠,观察小鼠移植瘤生长情况。采用双荧光素酶报告基因检测系统初步验证EIF2C2(eukaryotic translation initiation factor2C-2,真核转录起始因子2C-2)是miR-125b的靶基因,在两株细胞中检测候选基因EIF2C2mRNA表达和蛋白水平变化。结果：Hep-2-miR-125b能够稳定、高水平表达miR-125b,miR-125b过表达后能够抑制Hep-2细胞的增殖能力,抑制NOD/SCID小鼠体内成瘤能力,使Hep-2细胞停滞于G0-G1期,凋亡没有变化。双荧光素酶报告基因检测系统显示miR-125b能够抑制EIF2C2载体40%的荧光素酶活性,验证EIF2C2是miR-125b的靶基因,并在mRNA水平和蛋白水平上进一步证实miR-125b可以抑制EIF2C2的表达。结论：上调miR-125b通过靶向EIF2C2抑制喉癌Hep-2细胞增殖,本研究为以miR-125b作为靶点治疗喉癌提供了一定的理论依据。