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目的：(1)分离、纯化肝细胞系HepG2细胞分泌的高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1protein, HMGB1),并加以鉴定。(2)探讨HMGB1在体外对巨噬细胞RAW264.7增殖、释放乳酸脱氢酶(lactate Dehydrogenase, LDH)、凋亡以及分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a, TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1beta, IL-1β)和白介素-6(IL-6)的作用。方法：(1)分别培养人肝细胞系HepG2细胞与免疫细胞系U937细胞,采用400ng/mL的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激20h后收集细胞培养液上清。依次采用超滤浓缩、阳离子交换层析(CM-Sepharose cation exchange chromatography)、阴离子交换层(DEAE-Sepharose cation exchange chromatography)、Sephadex G75凝胶过滤层析(Sephadex G75-gel filtration chromatography),结合免疫沉淀的方法,进行分离纯化。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及western印迹法进行蛋白分子质量及性质鉴定。(2)体外经不同浓度的HMGB1(10,50,100ng/mL)刺激24h,并以100ng/mL于不同时间点(8h,24h,48h)刺激巨噬细胞RAW264.7,采用MMT法检测巨噬细胞的增殖,收集培养上清,测定上清中的LDH含量。(3)体外经不同浓度的HMGB1(10,50,100ng/mL)刺激24h,或以100ng/mL的HMGB1作用不同时间(8h,24h,48h)后,采用TUNEL法检测巨噬细胞凋亡的情况。(4)体外经不同浓度的HMGB1(10,50,100ng/mL)刺激24h,或以100ng/mL作用不同时间(8h,24h,48h),采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清液中TNF-α IL-1β以及IL-6水平的变化。结果：(1)从2株细胞培养上清分离纯化得到的蛋白经SDS-PAGE鉴定,其纯度达90%以上,分子质量约为26kD, Western印迹法鉴定为HMGB1蛋白。(2)MTT结果显示,HMGB1不同剂量(10,50,100ng/mL)组以及100ng/mLHMGB1作用不同时间点(8h,24h,48h),巨噬细胞的增殖能力均明显低于巨噬细胞空白对照组(P<0.05)。(3)LDH检测结果显示,HMGB1不同剂量(10,50,100ng/mL)组以及100ng/mLHMGB1作用不同时间点(8h,24h,48h),巨噬细胞释放LDH的量均明显高于巨噬细胞空白对照组(P<0.05)。(4)经不同浓度的HMGB1刺激24h,其中100ng/mL组HMGB1诱导巨噬细胞凋亡效应最强,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。100ng/mL的HMGB1作用巨噬细胞不同时间后,以48h组凋亡率发生最高,明显高于对照组(P<0.05)。(5)经不同浓度的HMGB1刺激24h,可促进巨噬细胞TNF-α、IL-1β和IL-6表达增强,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),其中HMGB1剂量为100ng/mL时作用最强,呈剂量-效应关系。采用100ng/mL的HMGB1作用不同时间后,培养上清液中TNF-α,IL-1β和IL-6的表达水平在48h达高峰(P<0.01),呈时间-效应关系。结论：(1)该纯化方法简便、可行、效果好,可以获得纯度较高的HMGB1。(2)HMGB1能抑制巨噬细胞的增殖,促进巨噬细胞LDH的释放,诱导巨噬细胞的凋亡和促进TNF-α、IL-1β与IL-6的释放,并呈时间-浓度依赖性。