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背景和目的视网膜中央动脉阻塞(central retinal artery occlusion, CRAO)是一种严重的致盲性眼病,是急性视网膜缺血性病变,目前尚无理想的治疗方法。Schmidt等1992首次应用尿激酶选择性眼动脉溶栓技术治疗CRAO获得初步的效果,患者的视网膜水肿减轻、缺血改善、视力显著提高。随着方法不断改进,有研究显示局部介入动脉内溶栓治疗能明显改善视力,但临床有发生偏瘫等严重并发症的报道。这些严重的系统并发症是由于尿激酶的作用范围太广产生的,如果能使尿激酶的作用仅局限在眼内,就能有效的避免中枢神经系统的严重并发症。尿激酶(Urokinase, UK)是目前临床应用最广泛的溶栓药,用于前房冲洗、结膜下注射等局部治疗未见发生严重并发症的报道。UK属于非纤维蛋白特异性纤溶酶原激活剂,具有半衰期短但降解纤维蛋白原和凝血因子的作用却能持续达12-24小时之久的特点,而且对人体无抗原性,不会引起过敏反应。Kamei等曾报道玻璃体腔内注射纤溶酶原激活剂能穿透家兔视网膜,并溶解视网膜下血凝块,未见明显副作用。但是玻璃体腔注射纤溶酶原激活剂能否治疗视网膜血管阻塞性疾病,目前尚不清楚。我们假设存在玻璃体腔注射UK的技术治疗视网膜血管阻塞性疾病的可能性,首先要观察UK能否进入视网膜血管内。本研究通过对兔眼进行视神经结扎后玻璃体腔内注射尿激酶,观察尿激酶的对视网膜血管的穿透能力,从而为玻璃体腔注射UK治疗视网膜血管阻塞性疾病奠定基础。材料与方法方法选用健康成年家兔54只,随机分为A、B、C、三组,每组18只,A、B组为实验组,C组为对照组,均以右眼为实验眼。A组对家兔视神经进行结扎,然后玻璃体腔内注射浓度容量为5000U/0.1ml的尿激酶(Urokinase, UK), B组不做视神经处的结扎处理,直接在玻璃体腔内注射浓度容量为5000U/0.1 ml的尿激酶(Urokinase, UK), C组直接在玻璃体腔内注射0.1ml磷酸缓冲液(Phosphate Buffered Saline, PBS)。以玻璃体腔内注射后24小时为观察时间点,A、B组分别随机选取10只家兔,C组随机选取2只家兔摘除眼球,制作视网膜组织的石蜡切片,进行视网膜组织常规病理检查和免疫组织化学染色观察尿激酶的渗透能力,使用Nikon DS-Ril生物显微镜进行图像采集并用及Image-Pro Plus 6.0医学专业图像分析软件计算切片中每个血管染色的平均光密度(Mean Optical Density, MOD)值。统计学处理采用SPSS 17.0软件进行统计学分析,采用两独立样本的检验(t检验)比较,检验水准为a=0.05。结果1.渗透进入视网膜血管中UK的定性与定位表达：C组及实验组阴性对照切片的血管腔中均未见阳性表达的棕黄色颗粒,A、B组的免疫组织化学染色的切片中可见阳性表达的棕黄色颗粒, A组阳性表达定位主要在视网膜血管壁、血管腔内和视网膜神经纤维层、神经节细胞层、内丛状层、内核层、外丛状层及外核层。B组均可见沿内界膜表面呈棕黄色的带状分布,在视网膜血管壁及其他层次内也可以见棕黄色颗粒。2.UK的视网膜血管穿透能力分析：A组免疫组织化学染色切片中可见视网膜血管腔和其他各层内有棕黄色颗粒, B组免疫组织化学染色切片均可见沿内界膜表面呈棕黄色的带状分布,在视网膜血管壁及其他层次内也可以见棕黄色颗粒,但是视网膜血管腔内未见棕黄色颗粒。玻璃体腔内注射相同药物浓度和作用时间A组与B组间视网膜血管穿透能力的比较：视神经结扎和无视神经结扎因素,两组间UK的视网膜血管穿透能力的差别具有统计学意义(t=14.603,p<0.05)。3.尿激酶的视网膜毒性作用：C组家兔视网膜结构完整,各层次结构完整,排列整齐规则。B组视网膜表面光滑,视网膜各层分界清晰,外核层细胞数量有减少,内外核层细胞核间隙稍稀疏,其余层次未见明显变化。可见5000U/0.1ml的尿激酶对视网膜组织有一定的毒性作用。结论1.兔眼视神经结扎后1小时玻璃体腔内注射的尿激酶,24小时后能够穿透视网膜血管壁进入视网膜血管腔内。2.尿激酶对视网膜组织有一定的毒性作用。