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目的:了解浙江省健康人群中大肠埃希菌多粘菌素耐药现状和mcr-1基因的携带情况,明确大肠埃希菌mcr-1基因携带株流行特征,阐明mcr-1基因在大肠埃希中传播扩散的分子机制,为临床上mcr-1基因扩散和传播提供风险评估和防控的重要科学依据。方法:收集浙江省健康人群肠道粪便标本1011份,肉汤富集方法扩增并采用聚合酶链反应检测多粘菌素耐药基因mcr-1;琼脂稀释法测定抗生素对mcr-1基因阳性菌株的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC),PCR检测其对临床常用头孢菌素和喹诺酮类抗生素的耐药基因;采用接合实验验证mcr-1基因是否位于可转移质粒上;脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)进行菌株同源性及其分子分型分析。结果:1011份健康人群的肠道标本中,127份检出多粘菌素耐药基因mcr-1,阳性率为12.6%,其中两例标本同时检出携带mcr-1基因的大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌。在分离到的129株mcr-1阳性菌株中,116株为大肠埃希菌,占总阳性分离菌的90.0%。携带mcr-1基因的大肠埃希菌对第三代头孢菌素耐药率较高,对第四代头孢菌素有所降低,头孢吡肟的耐药率仅为5%;其对环丙沙星耐药率为35.5%,对其他抗生素耐药率都较低。129株mcr-1基因阳性菌株中,33株检测到超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases,ESBLs)基因,检出率为25.6%,此外还检测到20株菌携带广谱β-内酰胺酶基因bla TEM-1和1株bla SHV-1;14株菌检测到质粒介导的喹诺酮耐药基因,其中7株为qnrS1阳性,2株qnrS2阳性,5株检测到acc(6’)-Ib-cr突变。116株mcr-1阳性大肠埃希菌中接合成功77株,接合子除了携带mcr-1基因还同时携带bla CTX-M和质粒介导的喹诺酮耐药基因,显示携带耐药基因的质粒的可转移性。MLST分型共检出67种ST型,总体比较分散,其中有18株为ST10(15.5%),与ST10仅1个管家基因差异的8个ST型共有16株(13.8%),均属于CC10克隆复合群。脉冲场凝胶电泳显示,除杭州地区(菌株编号30、32)和嘉兴地区(菌株编号94、95)各2株菌株中存在同源性以外,其他地区内和不同的地区间均无同源菌株存在。结论:1.多粘菌素耐药基因mcr-1在浙江省人群肠道菌株中有较高的携带率,达12.6%,其中90.0%存在于大肠埃希菌,因此大肠埃希菌是目前发现的多粘菌素耐药基因最大的储存库。2.携带多粘菌素耐药基因mcr-1的细菌对其他临床常用抗生素显示了较好的敏感性,仅对头孢菌素及喹诺酮类抗生素耐药率稍高,尚未发现碳青霉烯耐药的mcr-1阳性菌株。3.接合试验证实多粘菌素耐药基因mcr-1大多位于可转移质粒上,且该转移性质粒不但携带mcr-1基因还同时携带bla CTX-M-1/bla CTX-M-9组头孢菌素耐药基因,以及喹诺酮耐药基因qnrS1,造成了这些耐药基因在菌株间的传播。检测到2株大肠埃希菌同时携带mcr-1和新型嵌合重组耐药基因blaCTX-M-64,这在健康人肠道大肠埃希菌中首次同时发现存在。4.PFGE和MLST分型显示携带mcr-1基因的大肠埃希菌多数不同源,其中CC10克隆复合群最多,占29.3%(34/116)。PFGE仅有4株(两两同源)同源,mcr-1阳性大肠埃希菌并未出现克隆株传播现象。