目的：1、探索和建立适合中国人基因结构特征的脉冲电场凝胶电泳(PFGE)技术体系，使国内面肩肱型肌营养不良症(FSHD)的研究与国际并轨。 2、深入研究中国人4q35区EcoRI片段及10q26区同源性片段的结构多态性，探讨该同源性区域的可塑性、易位和嵌合情况，及其与D4Z4重复序列缺失的关系。 3、建立EcoRⅠ、EcoRⅠ／BlnⅠ及XapⅠ三酶切常规电泳基因诊断方法，进一步完善和优化适合中国人FSHD突变特征且易于临床推广应用的基因诊断体系。 4、应用PFGE技术，进行中国人FSHD基因结构突变特征和基因诊断研究，并探讨中国人FSHD的分子发病机理。 方法：1、采用低熔点胶包埋法抽提完整的基因组DNA，并进行原位酶切。 2、采用“全波段”PFGE技术体系，对4q35和10q26来源的EcoRI片段进行有效、完全的分离，并用曲线拟合法计算分析片段的长度。 3、采用EcoRI酶切／P13E-11探针Southern杂交方法检测EcoRⅠ／P13E-11片段，并采用EcoRI／BlnI双酶切获取4q型EcoRⅠ片段及XapI酶切获取10q型EcoRI片段。 4、采用SPSS11.0统计软件包进行样本统计量与总体参数分析、两样本均数、率的显著性差异比较及统计图表的设计。 结果：1、建立了适合中国人FSHD研究的PFGE技术平台，对FSHD相关的基因结构进行了有效的分离。 2、正常人的标准带型分布：在检测的110名正常人中，74.5％(82／110)为标准带型，无易位、杂合、体细胞嵌合等情况。其中，4q35EcoRI片段的长度均值为87.9±3.3kb(均数±标准误)，中位数为78.5kb；10q26同源性片段的长度均值为90.1±4.1kb，中位数为73.0kb。两种不同来源片段的长度分布无显著性差异(P=0.673＞0.05，t-test)。未发现小于35kb的4q35片段，而12.2％(10／82)的个体携带小于35kb的10q26短片段，最短1例为脉冲电场凝胶电泳体系的建立与中国人面肩胧型肌营养不良症的荃因分析中文摘要16kb。 3、正常人的非标准带型分布:在110名正常人中，易位型共占19.1%(21八10)，其中4q一loq型易位为9.1%(10/110)，10q~4q型易位为10.00，0(11八20)，两种易位形式的频率基本相等(P=0.819>0.05，chi一square test);体细胞嵌合者占3.6%(4/110)，其中1例女性存在小于35kb的4q35短片段嵌合细胞系。 4、Ec0RI、Ec0RI/BlnI及Xapl三酶切常规电泳基因诊断:所有FSHD患者均检测到1条小于35kb的4q35EcoRI致病片段，最小的片段长度为12kb。4例检测者携带了1条对Blnl和Xapl均敏感的4q一10q杂合型片段。 5、PFGE条件下的FSHD基因结构突变特征和基因诊断研究:所有被检测的FSHD家系的基因结构特征均得到明确。在家族型FSHD中，患病父/母将小于35kb的4q35Eco甩遗传给了患病子女(包括症状前患者和无症状基因携带者);在家族型和散发型患者中均存在4q~10q型易位，其中散发型的易位频率高达37.5%(3/8)，明显高于正常人的同型易位(P一0.043<0.05，exact一method)，且该易位片段来源于父亲;在8例散发型患者及双亲中，检测出2例体细胞嵌合型男性患者，2例女性无症状基因携带者。 结论:1、我们建立的PFGE技术体系适合国人FSHD研究，积累了中国人群(代表了非高加索人种)F SHD基因结构区的多项基本分析数据，填补了国内、外空白。 2、中国正常人4q35和loq26同源性Eco班片段的重复序列结构存在多态性和动态特征，标准型4q35片段均大于35kb，中位数为78.5kb，loq同源性片段的长度中位数为73.Okb，两者的长度无统计学差异。 3、中国正常人存在高频率的短10q同源性片段(<3 skb)，但该片段无致病性，需要甄别。 4、中国正常人存在4q35一1 Oq26区域的高度同源性、高频易位及体细胞嵌合现象，表明两种染色体间该区域有高频的互换，是染色体间重排的热区，与D4Z4拷贝的缺失可能相关。此结果支持了位置效应学说(P EV)。 5、三酶切诊断方法完善和优化了双酶切常规基因诊断体系，使不同来源的EcoRI片段的判断更加准确、直观，对特殊带型检测行之有效，有更高的临床应用价值。 6、PFGE条件下的DNA限制性片段长度多态性分析(RFLP)，是当前准确性最高的基因诊断法，且是国人FSHD基因结构突变特征分析所必不可少的。 7、中国人散发型和家族型FSHD均存在4q~10q型易位，此高频易位表明，减数分裂期可能存在与4q一IOq易位相关的D4Z4缺失机制;体细胞嵌合患者的出现，表明有脉冲lh场＆MLti泳体系的建立与中国人面肩肽型肌营养不良症的基因分析 中文摘要丝分裂期可能存在导致D4Z4缺失的机制。据此推测FSHD存在复杂的多途径的D4Z4拷贝缺失机制。 8、本研究还进一步证实，女性对致病片段的“耐受性”更高，这可能与男、女性自身的结构特点有关。