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杜仲是我国名贵滋补药材,具有补肝肾、强筋骨、安胎、降血压、久服轻身耐劳之功效,近些年来国内外学者对杜仲进行了深入的研究,发现杜仲对骨质疏松症具有积极的防治效果,但杜仲对于骨质疏松症的研究多停留于对成骨细胞增殖和分化效果的观察和体内效果观察,而杜仲对于骨质疏松症的防治机制的研究却少有涉及。本实验着眼于杜仲对骨质疏松症防治机制的研究,应用杜仲乙醇提取液培养MC3T3-E1成骨细胞,观察杜仲对MC3T3-E1成骨细胞的增殖和分化成熟作用和杜仲对OPG/RANKL比值的作用,为杜仲基于OPG/RANKL/RANK信号通路治疗骨质疏松症提供理论基础。本实验分为二个部分,第一部分为杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化的研究,第二部分为杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的OPG/RANKL比值的影响的研究。在第一部分杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的分化和增殖的研究中,首先用MTT法确定杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的适宜浓度区间,并确定应用于实验的终浓度。其次用高、中、低不同浓度的杜仲乙醇提取液培养MC3T3-E1成骨细胞,再次用MTT法确定杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的增殖作用。然后用高、中、低不同浓度的杜仲乙醇提取液培养MC3T3-E1成骨细胞,检测ALP观察杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的分化作用。最后用茜素红染色法镜下观察高、中、低不同浓度的杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的钙化作用。第二部分中首先用RT-PCR法观察,高、中、低不同浓度的杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的OPG和RANKL的转入情况,进一步用ELISA法观察杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的OPG和RANKL的表达情况,并确定杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞OPG/RANKL比值的影响。本实验发现,杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的适宜浓度区间为10-1～10-3mg/mL,而杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞的增殖和分化研究发现,高、中、低不同浓度的杜仲乙醇提取液均可促进MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化成熟,且均表现出浓度依赖性。第二部分对OPG/RANKL比值的研究发现,杜仲乙醇提取液不仅可以从转入过程对MC3T3-E1成骨细胞促进OPG、抑制RANKL的作用,而且可以对于OPG和RANKL的表达也有促进和抑制作用,并且对于OPG/RANKL的比值有上调作用。通过本实验可知,杜仲乙醇提取液对MC3T3-E1成骨细胞有促进增殖和分化成熟的作用,并且杜仲乙醇提取液通过MC3T3-E1成骨细胞分化成熟作用于OPG和RANKL,且可上调OPG/RANKL的比值而间接达到抑制破骨细胞的作用。由此可知,杜仲既可促进成骨细胞增殖和分化成熟增加骨量,也可通过上调OPG/RANKL比值间接抑制破骨细胞的活性,而抑制骨吸收的过程。所以杜仲对骨质疏松症的防治具有积极的意义。