论文部分内容阅读
目的：利用D-半乳糖来建立中枢性老年性聋的动物模型,为中枢听觉系统老化机制的研究提供有效简便的途径。方法：用5%D-半乳糖(150mg/kg)对雄性Wistar大鼠进行每日颈背部皮下注射,共8周,以同等剂量生理盐水每日颈背部皮下注射作为对照组,HE染色和尼氏染色观察听皮层、下丘及耳蜗核的形态学改变,Taqman探针实时荧光定量多聚酶链反应(real time qPCR)检测线粒体DNA 4834 bp大片段缺失率。结果：模型组大鼠听皮层、下丘及耳蜗核神经元数目(分别为322.58±35.25,344.08±40.50,207.33±22.01／mmm2)比对照组(278.13±41.67,292.83±43.91,145.41±25.07/μm2)显著减少(P＜0.05),并出现细胞排列紊乱,层次不清,胞浆尼氏体减少,可见较多胞质浓染的缺血神经元,间质结构疏松,胶质细胞增生,毛细血管增生、扩张,并出现较多病理性形态改变,如迂曲、扭曲、球形及线形改变。模型组听皮层、下丘、耳蜗核的线粒体DNA 4834 bp缺失率(16.22±1.29%,21.56±4.57%,13.96±2.47%)比对照组(11.24±1.09%,10.01±0.98%,8.78±0.94%)显著升高(P＜0.05)。结论：D-半乳糖可引起大鼠中枢听觉通路上的老化改变。目的：比较D-半乳糖模型大鼠和自然衰老大鼠听觉中枢的改变,并探讨其老化发生的可能机制。方法：30只1月龄雄性Wistar大鼠随机分为两组：①D-半乳糖组(15只)：以5%D-半乳糖(150mg/kg)每日颈背部皮下注射,共8周；②对照组(15只)：同等剂量生理盐水,每日颈背部皮下注射,共8周。另取22-24月龄同品系大鼠(15只)作为自然老化组。造模完毕后,每只动物检测听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)和中潜伏期电位(middle latency response, MLR);实时荧光定量PCR检测听皮层、下丘、蜗核的线粒体DNA 4834 bp缺失率；硫代戊巴比妥法检测丙二醛(MDA)的含量；光镜和透射电镜下观察各部位的病理学变化；TUNEL (terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated UTP nick-end labeling)法检测各部位细胞的凋亡情况。结果：与对照组相比,自然老化组大鼠ABR阈值提高,各波潜伏期、Ⅰ-Ⅳ波间期及MLR Pa潜伏期均延长,而D-半乳糖组ABR阈值无改变,Ⅲ,Ⅳ，Ⅴ波潜伏期和Ⅰ-Ⅳ波间期延长,Pa波潜伏期延长,Ⅰ,Ⅱ波潜伏期虽有延长趋势,但无统计学差异；两组老化大鼠听皮层、下丘、蜗核中MDA含量以及线粒体DNA 4834 bp缺失率比对照组显著升高,凋亡细胞数增加,并出现细胞结构排列紊乱,神经元胞浆中脂褐素增多,线粒体肿胀,内质网扩张,呈广泛空泡化改变,有髓神经纤维分离、断裂等退行性改变。结论：①年龄相关性中枢听觉功能障碍以及退行性改变存在于D-半乳糖拟老化大鼠和自然老化大鼠中。②氧化应激、mtDNA大片段缺失以及凋亡参与了中枢听觉系统的老化过程。目的：探讨线粒体DNA损伤发生的机制及碱基切除修复系统在听觉中枢老化中的作用。方法：48只雄性wistar大鼠随机分为4组：D-半乳糖低、中、高剂量组和生理盐水对照组,分别于每日皮下注射5%D-半乳糖150、300、500mg/kg和等体积生理盐水,共8周。采用实时荧光定量PCR和western blot方法检测各组大鼠听皮层、下丘和耳蜗核中线粒体DNA 4834 bp缺失率以及DNA修复酶8-氧鸟嘌呤糖苷酶(8-oxoguanine DNA glycosylase, OGG1)和DNA聚合酶γ(DNA polymeraseγ, DNA polγ)的基因和蛋白水平的变化；JC-1荧光探针法检测各部位的线粒体膜电位。结果：与对照组相比,三组D-gal组听皮层、下丘及蜗核中线粒体DNA 4834 bp缺失率明显增高(p<0.05),高剂量D-gal组升高最明显,其中听皮层和耳蜗核中D-gal低剂量组与中剂量组CD缺失率无显著性差异(p＞0.05),与高剂量组差异显著(p＜0.05),而下丘中D-gal三个剂量组之间无显著性差异(p>0.05)。D-gal各剂量组三个部位OGG1和polγ的基因和蛋白表达水平与对照组均明显降低(p＜0.05),并随D-gal剂量增大而明显降低,同时线粒体膜电位也显著降低(p＜0.05)。结论：在听觉高级中枢老化的过程中线粒体DNA损伤可能是由于其修复功能减退造成的。