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痛风是长期嘌呤代谢障碍、血尿酸增高引起的代谢性疾病,高尿酸血症是痛风的重要生化基础。黄嘌呤氧化酶作为尿酸生成的关键酶,是降低尿酸药物的作用靶点。虎杖药材为蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sielb.et Zucc)的干燥根茎和根。据文献报道虎杖提取物具有黄嘌呤氧化酶抑制活性,能够显著降低高尿酸血症动物模型血尿酸水平,但缺乏虎杖提取物对黄嘌呤氧化酶抑制活性物质基础和作用机制的系统深入研究。本实验通过考察不同色谱柱、流动相组成和检测波长,建立了虎杖提取物HPLC分析方法。采用大孔吸附树脂的分离模式进行分离,使用所建立的HPLC分析方法检测分离效果。结果显示,各洗脱部位分离效果良好。采用HPLC法测定黄嘌呤氧化酶-黄嘌呤反应体系尿酸生成量,体外测定不同分离部位抑制作用。结果显示,除水洗脱部位外,各洗脱部位均具有一定抑制活性,其中30%和50%洗脱部位活性较高(50μg/mL浓度下抑制率分别为69.04±0.47%和51.22±1.14%)。综合运用大孔吸附树脂柱色谱、十八烷基键合硅胶柱色谱(ODS)和制备液相色谱等方法从虎杖30%和50%大孔树脂洗脱部位中分离得到8个化合物;综合运用EI-MS、1H-NMR、13C-NMR等波谱数据鉴定其结构分别为:虎杖苷(化合物I),白藜芦醇(化合物II),大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物III),决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物IV),大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物V),大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物VI),大黄素(化合物VII),大黄酚(化合物VIII)。黄嘌呤氧化酶体外酶动力学实验,发现6种化合物具有一定的抑制活性。其中白藜芦醇和决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷相对较高,IC50分别为91.04μM和54.31μM。采用Lineweaver-Burk双倒数作图法确定活性化合物抑制类型,发现白藜芦醇为竞争型抑制,决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷为非竞争型抑制。决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的黄嘌呤氧化酶抑制作用为首次报道。