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目的:本研究通过鉴定大鼠neurtin基因的转录本,利用显微注射的方法获得过表达大鼠neuritin基因的转基因小鼠模型,为从系统生物学水平研究neuritin基因的功能奠定实验基础。方法:1)利用比较基因组学分别设计与小鼠2个转录本同源的引物,采用RT-PCR的方法钓取大鼠neuritin基因。采用生物信息的方法对大鼠neuritin的序列同源性及蛋白结构进行全方位预测分析;2)构建由CMV超强启动子驱动大鼠neuritin基因表达的真核表达载体-pc DNA3.1(+)-neuritin,RT-PCR扩增大鼠neuritin基因的编码区,并在两端引入Xho-Ⅰ和Nhe-Ⅰ酶切位点,对扩增产物和表达载体双酶切后连接,然后转化DH5α大肠杆菌,经菌落PCR、质粒的双酶切及测序筛选出重组的pc DNA3.1(+)-neuritin阳性质粒;3)用受精卵雄原核显微注射法制备neuritin转基因小鼠:将pc DNA3.1(+)-neuritin质粒用BglⅡ和StuⅠ限制性内切酶消化,回收纯化约为2.3kb带有Neurtin基因的片段。将纯化后的片段显微注射受精卵,经短暂体外培养,筛检存活的胚胎,移植入假孕受体小鼠输卵管,常规饲育。通过PCR方法检测出生小鼠基因组neuritin基因的插入和鼠尾组织中大鼠neuritin基因的表达。结果:1)大鼠只存在一个neuritin转录本,编码142个氨基酸,与其他动物的编码序列高度同源;三级蛋白结构预测分析结果显示大鼠Neuritin蛋白富含α螺旋,其结构和理化性质无异于人类Neuritin蛋白;2)成功地构建了pc DNA3.1(+)–neuritin真核表达载体,经双酶切、测序后证实neuritin基因插入载体的多克隆位点Xho-Ⅰ和Nhe-Ⅰ酶切位点间;3)用原核显微注射711枚受精卵,经短暂体外培养存活275枚,存活率为38.67%,移植到30只受体鼠输卵管中,受体鼠怀孕26只,共生产45只后代鼠(F0)。经PCR检测,初步证实其中3只为neuritin阳性整合小鼠,整合率为6.66%;RT-PCR及测序鉴定出4只F1代小鼠鼠尾组织存在大鼠neuritin基因的表达,阳性转基因表达率为28.57%。结论:1)鉴定了大鼠neuritin基因只有1个转录本;2)成功构建pc DNA3.1(+)-neuritin真核表达载体;3)成功建立过表达大鼠neuritin基因的转基因小鼠模型。