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基因重组别藻蓝蛋白(雷普克)为本实验室利用基因工程技术构建的海洋活性蛋白。经过前期的开发证明,雷普克为一高效低毒的抑瘤因子,具有较大的开发潜力。本研究对雷普克的药学资料进行了研究,并初步探讨了其作用机制。1.根据基因工程药物研发要求,利用卡那抗性基因替换了原生产菌株的氨苄青霉素抗性基因,并采用平板划线法将雷普克生产菌株传代至100代,其生长速度、抗生素抗性、限制性内切酶酶切图谱、雷普克表达水平等均无明显差异,显示出较好的遗传稳定性。经测定三批雷普克的N端15个氨基酸序列均一致。2.在原来小试发酵和纯化生产工艺的基础上,进行了放大生产,并进一步优化补料速率和纯化工艺。放大后的生产工艺基本稳定,雷普克表达量占菌体可溶性蛋白的41.3%,OD600达到78,纯化后雷普克纯度达到98%以上,生产规模达到克级水平。进一步的药效学试验表明,雷普克对人肝癌SMMC-7721裸鼠模型具有显著的抑制作用。3.采用SRB法建立了雷普克体外活性检测方法,利用HPLC等技术对雷普克的肽指纹图谱进行了分析,保证了样品批次之间的一致性,并对雷普克中的内毒素、残余宿主蛋白等微量杂质进行了测定,进一步完善了雷普克质量检定体系。4.抗肿瘤机理探索:初步的药理试验结果表明,雷普克无明显的体外细胞毒作用; 经体内给药可以促进T细胞的增殖,促进细胞因子IL-2和γ-IFN产生。采用脱氧核糖法测定显示,雷普克具有较强的羟自由基清除能力。提示免疫促进和羟自由基清除能力有可能是雷普克抗肿瘤作用机制之一。5.抗肿瘤活性验证:分别构建表达了6种重组别藻蓝蛋白亚基组分,进行了体内活性筛选。结果显示,His-βAPC对S180实体瘤、小鼠H22肝癌和人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠模型均显示出了较好的抑瘤效果,有望开发为新一代抗肝癌创新药物。本研究完善了雷普克药学资料,并初步探讨了其作用机理,为其作为抗肿瘤一类新药的开发进一步奠定了基础。